2004～2006年肇庆市部分食品化学污染状况分析

目的：了解肇庆市本地产的主要食品的化学污染状况。方法：自2004年起每年分夏秋两季在各监测网点随机抽检各类食品,监测有机磷农药、黄曲霉毒素B1、铅、镉、铝、食品添加剂等项目。结果：3年共采集14大类食品,获得2207个检验数据,按有关国家标准进行评价,铅、镉的合格率分别为96.0%和92.9%,其中皮蛋、茶叶中铅,猪肾、干冬菇和大米中镉的合格率低;蔬菜的甲胺磷超标率为15.4%;酱腌菜类苯甲酸钠超标率较高;面制食品中馒头、油条和油饼的铝含量全部超出标准。结论：肇庆市食品化学污染的问题整体不严重,但对部分加工食品应加强卫生管理和监测。     

2014-2016年广东省肇庆市人感染H7N9禽流感病毒基因组特征分析

目的 了解广东省肇庆市2014-2016年人感染H7N9禽流感病毒基因进化特征.方法 对肇庆市17例H7N9患者咽拭核酸直接进行8节段基因序列扩增与测定,用BioEdit5.0、MEGA6.0进行同源性和重要氨基酸位点分析,采用Neighbor-Joining法构建进化树,参比序列从GenBank下载.结果 7份H7N9病例标本获得8节段全基因序列,HA与A/chicken/Dongguan/695/2014 (H7N9)相似度最高,NA与A/ chicken/Dongguan/1075/2014 (H7N9)相似度最高;内部基因与2013-2014年广东东莞、深圳禽源H7N9及H9N2相似度较高.HA和NA基因与广东省东莞、广州、深圳等地市的H7N9序列同处于珠三角进化分支,与安徽、浙江、江苏等长三角分支的序列相似性低.HA蛋白受体结合位点发生G186V、Q226L变异,裂解位点序列均为PEIPKGR↓ GLF,含有2个碱性氨基酸;M2蛋白上发现耐药位点S31N,PB2蛋白上发现E627K突变,NA蛋白上未发现耐神经氨酸酶的位点变异.结论 肇庆市人感染H7N9病毒株可能来源于2013 2014年广东省珠三角地区禽源H7N9和H9N2,G186V、Q226L和E627K位点变异增强了对人的易感性.     

香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝／反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0．183％。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌。16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99．5％以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan—MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。     

筛选与确诊试验在检测香港海鸥菌中的建立与应用

目的建立简便、快速、准确、特异的香港海鸥菌实验室诊断技术。方法采集淡水鱼类、胃肠炎腹泻患者新鲜粪样,接种于改良头孢哌酮MacConkey（CMA）培养基,对典型菌落分别进行氧化酶、触酶、三糖铁（TSI）3项筛选试验和常规生化鉴定,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁（TSI）试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊;通用引物扩增16SrRNA并与香港海鸥菌HKU1株进行同源性分析。结果在92份淡水鱼样品和211份胃肠炎腹泻患者粪样中,共检出香港海鸥菌11株和1株,阳性率分别为11.96%（11/92）和0.48%（1/211）。筛选与确诊试验和常规生化试验的检测结果一致,符合率为100%（12/12）。分离的香港海鸥菌16SrRNA序列与HKU1株同源性在99.5%～100%之间,仅差1～2个碱基。结论本文建立的筛选与确诊试验适用于香港海鸥菌的诊断。     

4例下肢动脉闭塞后截肢病人的护理体会

近年来,随着人们生活水平的提高,饮食结构的改变和社会老龄化的发展,闭塞性动脉硬化症逐渐增多,由其引发的下肢缺血性截肢术也呈上升趋势。由于患者年龄老化、全身状况较差、血管退行性改变及术后血管病变仍然存在等因素均可影响术后恢复及创面的愈合。因此对缺血性肢体截肢术的护理提出了更高的要求。以下将我院自2010年1月至2011年6月间4例因血管闭塞导致截肢病例的护理体会报告如下。     

2014年肇庆市登革Ⅰ型病毒流行株E基因序列分析

目的：了解肇庆市2014年登革热病Ⅰ型病毒流行毒株E基因序列。方法收集肇庆市2014年登革热患者病例资料及急性期血清,用C6／36细胞培养分离登革热病毒,阳性分离株采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增E基因,绘制系统发生树,进行生物信息学分析。结果36份标本中20份病毒分离培养阳性,获得肇庆市2014年Ⅰ型登革热病毒流行20株毒株的E基因序列,其同源性与中山市的2株流行毒株接近,但与广州市Ⅰ型登革病毒流行株相差较远。结论肇庆市登革热疫情同中山市登革热流行程度相关联且流行特点为输入性流行。     

肇庆市副溶血性弧菌血清分型和耐药性研究

目的掌握肇庆市副溶血性弧菌的血清型分布及耐药水平,为预防副溶血性弧菌食源性疾病的发生,有效地指导临床合理用药提供依据。方法血清学检测采用玻片凝集法,用K-B法测定耐药性。结果2007-2009年收集的62株副溶血性弧菌中,在46株食物中毒分离株中完全分型45株,共分出8个血清型,以O3：K6为主,占45.7%（21/46）;在8株食品污染物分离株中完全分型8株,共分出4个血清型,以O1：K48为主,占50.0%（4/8）;在8株门诊病人分离株中完全分型8株,共分出4个血清型,以O3：K6为主,占50.0%（4/8）。对头孢呋辛、头孢噻肟、头孢噻吩有极高的耐药率,均在50.00%以上;对氧哌嗪西林、羧苄西林、氨苄西林、氯霉素的耐药率分别为38.71%、33.87%、20.97%和9.68%;对头孢曲松、头孢他啶、头孢西丁、环丙沙星、阿米卡星、左氟沙星、庆大霉素、四环素、甲氧苄啶等9种抗生素完全敏感。结论重点要防治O3：K6型及耐6种抗生素的副溶血性弧菌引起的食源性疾病,氨基糖苷类和喹诺酮类作为副溶血性弧菌感染的首选药物。     

肇庆市副溶血性弧菌血清型、毒力基因和脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的 通过副溶血性弧菌血清型、毒力基因和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型研究,建立肇庆市副溶血性弧菌DNA指纹图谱基因库。方法 对肇庆市食物中毒分离出的28株副溶血性弧菌和食品安全风险监测的各类水产品分离的17株副溶血性弧菌进行血清分型,耐热直接溶血素相关基因(trh)和耐热直接溶血素基因(tdh)PCR检测,对45株副溶血性弧菌进行PFGE分子分型。结果 食物中毒分离的28株副溶血性弧菌,血清型以O₄:K₈(32.14%)和O₃:K₆(25.00%)为主,17株水产品分离的副溶血性弧菌,血清型以O₁:K_UT(42.11%)为主;21株(46.67%)为tdh⁺trh^-菌株,23株(51.11%)为tdh^-trh^-菌株,1株(2.22%)为tdh^-trh⁺。45株副溶血性弧菌的PFGE相似值为3.9%~100.0%,被分为36种不同的PFGE型别,带型100%相同的菌株几乎都出现在同一年代相近的时间点,但也出现了跨年代菌株。结论 肇庆市食物中毒的副溶血性弧菌以O₄:K₈和O₃:K₆血清型为主,多数菌株携带tdh基因。PFGE结果提示肇庆市流行的副溶血性弧菌存在多克隆来源。     

广东省肇庆市2014-2015年登革病毒分子分型及初步溯源研究

目的 了解广东省肇庆市2014-2015年登革病毒（DENV）的基因型别和可能的输入来源。方法 收集登革热临床诊断病例急性期血清,对实时荧光反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测阳性标本进行病毒培养,分离株进行E基因扩增与序列测定,用Mega 5.1软件进行分子分型和系统进化树构建。结果 409份样品中147份实时荧光RT-PCR检测阳性（35.94%）,其中2014年阳性144份（39.99%）,以DENV 1（139/361）为主;2015年阳性3份（6.25%）,以DENV 3（2/48）为主。共获得22株DENV分离株,其中20株为2014年DENV 1型的genotype Ⅰ和Ⅲ,与2013-2014年广州、佛山市分离株核苷酸同源性分别为99.40%~100.00%和99.20%~100.00%,与新加坡、泰国、马来西亚和印度尼西亚分离株亲缘关系次之;2株为2015年DENV 3的genotype Ⅲ,与近年新加坡和印度尼西亚分离株的核苷酸同源性为98.20%~99.70%。结论 广东省肇庆市2014年暴发流行的DENV 1为genotype Ⅰ和Ⅲ,可能由广州市和佛山市输入,2015年散发的DENV 3为genotype Ⅲ,由佛山市输入,疫情毒株可能源于新加坡、印度尼西亚等东南亚流行株。     

札如病毒实时荧光RT-PCR的建立与应用

目的 建立一种可快速、全面、准确检测人感染札如病毒的TaqMan探针荧光实时RT-PCR方法。方法 利用Bioedit2.0、MAGE6.0软件对可感染人的GⅠ、GⅡ、GⅣ、GⅤ基因群札如病毒进行保守序列比对,应用Primer6.0、Primer Express 3.0进行引物和TaqMan探针的设计与评价,分别设计了两套引物及TaqMan探针,克隆相应靶基因并构建阳性标准品,建立及优化一步法实时荧光RT-PCR反应体系,并进行灵敏度、特异度、临床标本验证试验。结果 根据基因序列比对分析,札如病毒ORF1与ORF2连接区具有相对高保守序列,针对GⅠ、GⅡ、GⅣ及GⅤ设计了一条共用的下游引物、以及两套上游引物和TaqMan探针,能覆盖当前GenBank可见的感染人的札如病毒基因型,在同一反应管中建立了同时检测札如病毒四个基因群的实时荧光RT-PCR,并可将GⅤ与GⅠ、GⅡ、GⅣ进行初步分型,对人柯萨奇病毒、诺如病毒、轮状病毒、腺病毒等非靶标病原体无扩增,仅对札如病毒有特异扩增,最低检测下限为10拷贝/反应。结论 本研究建立了札如病毒一步法实时荧光RT-PCR反应体系,可将GⅤ与GⅠ、GⅡ、GⅣ区分开来,为腹泻疫情防控和风险评估提供快速、准确的病原学依据。