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目的 对结核分枝杆菌H37Rv菌株中功能未知基因Rv1048c进行生物信息学分析,构建重组表达菌株MS_Rv1048c,并研究其对小鼠巨噬细胞存活率的影响。方法 软件在线分析Rv1048c的氨基酸序列及其编码蛋白的基本性质,利用PCR扩增Rv1048c目的片段,构建重组质粒pMV261-Rv1048c,转入耻垢分枝杆菌,构建重组菌株MS_Rv1048c与空载菌MS_vec。分析该基因对菌株生长的影响;通过CCK-8、总胆固醇测定和油红(O)染色的方法,初步探究重组菌株感染巨噬细胞后对其活性的影响。结果 Rv1048c基因全长1 116 bp,蛋白由371个氨基酸构成,分子式是C1778H2821N521O525S10,预测该蛋白是一种定位在细胞外的含有多个磷酸化位点的、不稳定的亲水性蛋白。本试验首次成功构建未知基因Rv1048c的异源表达载体,生长曲线测定发现该基因使菌株生长缓慢,细胞实验发现基因增强了重组菌株对细胞的侵袭能力。结论 Rv1048c可能具有结核分枝杆菌独有的生长... 相似文献
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环介导等温扩增技术是一种可用于临床诊断的快速检测方法,可用于检测病毒、细菌、寄生虫等多种病原体。经不断完善,现已在临床检测过程中发挥重要作用。可用显色试剂对反应结果实现可视化,即结果的即时显示,无需后续验证。但是,无论是荧光染料还是显色指示剂,对反应过程都会产生或多或少的影响,目前研究表明羟基萘酚蓝是最好的显色试剂。同时,人们发现电化学技术也可以应用于此,使检测反应更快,操作更加简单。生物传感器可以对多种反应产物进行同步检测,而微流控芯片技术更是方便携带,有望成为实时检测技术的理想载体。 相似文献
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为了提高透射电镜对组织观察的准确性,在进行电镜样品超薄切片前,对大多数研究样品以及临床外检的标本,需做半薄切片进行光镜定位。为缩短整个定位程序的时间,提高电镜观察效率,我们以Field氏染法为基础,改进了半薄切片染色方法,应用于国产环氧树脂618包埋组织的半薄切片染色。通过对肾、肺、胃、皮肤、十二指肠、支气管、骨、神经、耳蜗、角膜等组织染色,均获得较满意的效果。与 相似文献
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目的构建副结核分枝杆菌SOD基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。方法以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-SOD和pET-28a(+),并将纯化的SOD基因亚克隆至pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET-28a-SOD,并将其转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western bloting分析。结果成功地构建出原核表达质粒pET-28a-SOD,并表达了约26.5kDa融合外源蛋白带,且具有牛副结核分枝杆菌抗原反应性。结论副结核分枝杆菌SOD基因在大肠杆菌中获得了表达,并具有抗原反应性,为进一步研究SOD作为诊断试剂或亚单位疫苗奠定了基础。 相似文献
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