绞股蓝实时荧光定量PCR内参基因筛选和验证北大核心

目的:筛选适宜绞股蓝不同组织表达分析的内参基因,掌握绞股蓝皂苷生物合成关键酶基因GpFPS在绞股蓝不同组织中的表达特性。方法:基于绞股蓝转录组数据,以10个内参基因作为候选基因,采用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder分析绞股蓝不同组织中10个候选内参基因的稳定性。利用实时荧光定量PCR技术,筛选出符合要求的内参基因,并实测基因GpFPS在绞股蓝不同组织中的表达情况。结果:候选内参基因在绞股蓝不同组织中的表达稳定性由高到低排序为PP2A、CYP、eIF4α、Actin、EF1α、TIP、18S、GAPDH、UBQ10、TUB6。GpFPS基因表达量在不同组织中由高到低分别是:嫩叶、老叶、花、卷须、成熟果、茎或根、幼果。结论:适合于绞股蓝不同组织基因表达分析的内参基因是PP2A和CYP,通过验证分析,该内参基因的可靠性强,为进一步研究绞股蓝皂苷生物合成相关基因的功能积累了必备的实验基础。     

积雪草皂苷生物合成基因筛选与表达量分析

目的：筛选积雪草皂苷生物合成相关的关键酶基因,并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进行验证。方法：采用HPLC对积雪草不同部位进行皂苷含量测定;利用转录组学、KEGG富集分析等手段挖掘积雪草皂苷生物合成关键酶基因;采用qRT-PCR技术验证挖掘出的关键酶基因在不同组织中的表达模式,并使用皮尔逊(Pearson)法分析关键酶与皂苷类成分的相关性。结果：在根、茎、叶、叶柄、果实这5个不同组织中,叶的积雪草皂苷含量最高;挖掘遴选出积雪草皂苷生物合成相关的关键酶基因4个,分别为氧化鲨烯环化酶(CaOSC1、CaOSC2)、鲨烯环化酶(CaSE)、鲨烯合酶(CaSS);这4个关键酶基因均在叶中表达量最高。结论：积雪草不同组织的皂苷含量与4个关键酶基因表达量关系紧密,该结果为今后探究积雪草皂苷生物合成与积累的调控机制积累了必要的研究基础。     

基于代谢组学的黑老虎果实发育过程中花青苷组分动态分析

[目的]对黑老虎三个不同发育时期果实中的花青苷组分进行定性和定量分析,探讨花青苷组分、含量与黑老虎发育过程中果实色泽的关系。[方法]通过超高效液相色谱-串联质谱技术建立靶向代谢组学检测方法,分析黑老虎果实中花青苷成分的动态变化。[结果]黑老虎果实发育过程的幼果期（S1）、转色期（S2）和着色期（S3）,果实颜色分别是绿色、淡红色和紫红色,而花青苷的总含量由S1时期未检测出花青苷,增加到S2和S3时期的（6.35±0.83）μg/g和（152.45±18.62）μg/g。代谢组学分析结果表明,黑老虎果实中有17种花青苷组分,其中矢车菊素3-O-芸香糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和飞燕草素3-O-葡萄糖苷为黑老虎果实中的主要花青苷组分,分别占总花青苷含量的51.48%（含量为56.97μg/g）、29.83%（含量为32.13μg/g）和10.50%（含量为10.36μg/g）。[结论]本研究鉴定了黑老虎果实不同发育时期花青苷的类别和含量,对黑老虎果实色泽形成的研究和进一步开发利用提供了科学依据。