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用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA,经PCR扩增,鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品.该方法的灵敏度可达0.1%,并且具有很好的稳定性. 相似文献
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液质联机法初步研究洛伐他汀的微生物转化 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:分析微生物对洛伐他汀的转化。方法:应用HPLC/MS技术测定转化产物的相对分子质量。其中液相色谱条件为色谱柱:Alltima ODS-2(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.5%乙酸(80:20);流速:1.0mL·min~(-1);柱温:室温。质谱为ZMD Micromass电喷雾质谱仪。结果:得到相应的HPLC和MS图谱,并对其分析发现此菌株对洛伐他汀有转化作用。结论:HPLC/MS适合于研究他汀类药物的微生物转化。 相似文献
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利用薄层层析法和HPLC法对 30 0株放线菌进行筛选 ,结果发现一株菌ST4 8对洛伐他汀有转化作用 .研究其菌龄、菌体干重、分批加入底物及底物诱导等条件对转化率的影响表明 ,菌株ST4 8在预培养基中培养 4 8h后接入转化培养基 ( 5 %接种量 ) ,此时菌体量最高 ,加入 0 .3mL底物后 ,继续培养 4 8h转化率最高 ( 2 0 .78% ) .一次性加入底物和分批加入底物的转化率分别为2 0 .0 2 %和 2 0 .0 8% ,并且这种转化作用不需要底物诱导 相似文献
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例1 29岁。孕1产0,孕40+5周,因先兆子宫破裂、相对性头盆不称、胎儿宫内窘迫、子宫口开全后,于1998年8月12日在硬膜外麻醉下急行子宫下段剖宫产术。术中因儿头位置深,所取子宫切口位置过低,又子宫收缩乏力,出血多。迅速缝合子宫切口。缝合过程中感觉切口下缘的长度远长于切口上缘的长度,且组织水肿,弹性差,当时未予注意。缝合膀胱反折腹膜时,发现子宫切口下缘退缩于膀胱后方,而误将子宫颈后唇当作子宫切口下缘与切口上缘缝合。拆除缝线,对合子宫切口上下缘重新缝合。 相似文献
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目的探索解脲支原体感染(UU)与早产儿支气管肺发育不良(BPD)的关系,以期为降低早产儿感染的发生率提供依据。方法收集浙江省诸暨市妇幼保健院2011年2月~2012年9月胎龄(〈35周)的152例早产儿脐带血,采用荧光定量PCR技术和放射免疫技术测定UU、血培养、白细胞(WBC)、C反应蛋白白(CRP)和白介素(IL)-8。根据UU检测结果分为UU阳性组和UU阴性组,对两组的基本资料、临床产科资料和实验室检查数据采用t检验和χ2检验进行统计学处理,分析UU和早产儿BPD的关系及其相关因素。结果152例早产儿UU阳性者26例(17.11%),UU阴性者126例(82.89%)。UU阳性组BPD6例(23.08%),UU阴性组BPD6例(4.76%),UU阳性组BPD发病率明显高于阴性组(χ2=9.942,P〈0.01);26例UU阳性者出生平均体重为(1022.43±466.68)g.126例UU阴性者平均出生体重为(1678.75±667.27)g,UU阳性组体重明显低于阴性组(t=4.7741,P〈0.01);UU阳性组的阴道分娩、胎儿早破和绒毛膜羊膜炎构成比均明显高于UU阴性组(χ2=6.545、7.611、5.302,P〈0.05或P〈0.01);UU阳性组CRP和IL-8均明显低于UU阴性组(t=1.264,P=0.000;χ2=12.819,P=-0.000)。Logistic回归分析显示相对于UU阴性,BPD相关因素为阴道分娩、胎膜早破、绒毛膜羊膜炎和IL-8(OR=I.149、3.300、2.875、4.183.均P〈0.05)。结论UU感染是早产儿BPD产生的一个重要原因,针对UU感染及相关因素采用恰当干预措施,可减少患儿感染。 相似文献
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目的 分析ΔNp63α基因过表达时人宫颈癌细胞Si-Ha基因表达谱的变化,筛选受ΔNp63α调控的潜在靶基因.方法 利用慢病毒转染技术构建稳定过表达ΔNp63α的转染组细胞株SiHa-ΔNp63α和对照组细胞株SiHa-NC.应用基因芯片技术研究两组细胞株基因表达谱变化,并进行生物学信息分析和实时荧光定量PCR验证.结果 基因芯片数据共筛选出差异倍数1.5倍以上的基因共1405个,其中843个基因在SiHa-ΔNp63α细胞中表达上调,562个表达下调.通过生物信息学分析显示这些基因主要参与细胞生长与周期、信号转导、细胞通讯、细胞黏附、细胞转移和侵袭等功能,涉及的信号通路包括抗原加工提呈、细胞因子与受体相互作用、细胞黏附分子、补体系统等.结论 研究ΔNp63α调控的潜在靶基因或信号通路,对探索宫颈癌发生发展的机制有重要意义. 相似文献
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利用PCR扩增技术以嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001染色体DNA为模板,扩增得到嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶编码基因perA。再与经EcoRⅠ酶切的温控表达载体pBV220连接,构建重组质粒,并转化宿主大肠杆菌JM109,得到耐热过氧化氢酶基因工程菌,然后对该工程菌在LB培养基和半合成培养基中的发酵条件进行了优化。结果表明:在LB培养基中,诱导时期和酶合成最佳诱导时间均为5h,最大产酶量达到72.9U/mL;在半合成培养基中,于30℃培养4h,再于42℃诱导培养6h,产酶量最高达到131U/mL。 相似文献
8.
为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD -3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD -3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计了4对简并引物用于扩增C.glycerinogenes的NAD -3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)基因片段,经过优化PCR反应条件,利用其中一对中等简并度的引物扩增出CgGPI)基因中约600 bp的保守核心片段.DNA序列及推绎的氨基酸序列进行比对分析表明,该基因片段与其他酵母的胞浆NAD -3-磷酸甘油脱氢酶基因的对应区域具有典型的保守区域,并且与安格斯毕赤酵母的GPI)基因相似性较高. 相似文献
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采用PCR的方法从产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes) 中扩增出3-磷酸甘油脱氢酶的编码基因及侧翼序列 CgGPD1,分别构建了含不同 CgGPD1 拷贝数的根癌农杆菌双元载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1(Ⅰ)、pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1(Ⅱ)和pCAM3300-zeocin-CgGPD1 -CgGPD1-CgGPD1(Ⅲ).在大肠杆菌JM109中,研究了其在不同质量浓度NaCl、葡萄糖胁迫下表达情况.结果表明,在大肠杆菌中GPDH的活性随着NaCl、葡萄糖质量浓度的升高而增加.当NaCl质量浓度达到2.5 g/dL时,GPDH的酶活比在0.5 g/dL NaCl下平均提高31.2%; 当葡萄糖质量浓度提高至10 g/dL时,GPDH的酶活比2 g/dL葡萄糖下平均提高31.8%;在相同的NaCl、葡萄糖质量浓度下,GPDH的活性随着 CgGPD1 拷贝数的增加而升高,JM109(Ⅱ)比JM109(Ⅰ)的GPDH酶活平均提高8.2%,JM109(Ⅲ)比JM109(Ⅱ)的GPDH酶活平均提高9.9%.以上结果表明,在大肠杆菌中 CgGPD1 基因的表达同样受渗透压胁迫调节. 相似文献
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利用PCR技术从大肠杆菌(既cherichia coli)中扩增出1.16kb的编码1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶的基因yqhD,将其连接到温控表达载体pHsh,得到重组哉体pHsh-yqhD,重组载体在大肠杆菌JM109中得到高效表达。SDS-PAGE分析显示:融合表达产物的相对分子质量均为43000,同核酸序列测定所推导的值相符。对含有yghD的基因工程菌进行表达研究表明:42℃诱导4h,1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶的酶活力达到100IU/mg,而对照菌株的酶活力仅为0.5IU/mg。 相似文献