幽门螺杆菌感染小鼠慢性胃炎模型的建立及评价

目的建立幽门螺杆菌(H.pylori)感染动物模型,评价H.pylori相关慢性胃炎胃黏膜病理变化。方法灌胃H.pylori SS1菌株建立在体感染,感染后第2周后采用快速尿素酶法和PCR法检测感染成功率;确认感染成功后再分别继续饲养至6周和12周,建立H.pylori相关慢性胃炎动物模型。实验结束后,取胃腺体组织别进行HE和硼酸美兰染色,分析胃炎程度及H.pylori感染程度;生化法检测胃组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),丙二醛(malondialdehyde,MDA)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量变化;RT-q PCR法检测胃组织中COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达的变化。结果与正常组相比,模型6周和12周组胃组织内可见H.pylori定植,并且黏膜层有不同程度的慢性炎性细胞浸润,腺体萎缩和肠化生情况;同时组织中CAT和SOD的含量明显下降,MPO和MDA的水平和COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达均有显著上升(P0.05或P0.01)。结论通过灌胃给菌的方法可以成功将H.pylori定植于小鼠体内,并在定植的6周和12周后均可引起慢性炎性细胞的浸润,并使增强胃腺体组织内氧化应激水平和促炎基因的表达,但12周模型感染程度更深,出现腺体萎缩和肠化生的情况。     

青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的改善作用

【目的】探讨青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的作用。【方法】将60只SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,知柏地黄丸组,青钱柳叶水提物高、中、低剂量组。复制阴虚内热型2型糖尿病大鼠模型:大鼠给予高脂饲料喂养,喂养第4周时,按0.2 mg·kg~(-1)·d~(-1)剂量连续皮下注射甲状腺素(T4)7 d;第5周时,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg,3周后造模结束。模型复制成功后,除正常组和模型组外,其余各组给予相应药物灌胃治疗4周。每周观察中医证候指标并评分。末次给药后,观察空腹血糖(FBG)值变化、血糖曲线下面积(AUC)及血清中尿素(Urea)含量;取肝脏称质量计算肝指数,并检测肝组织肝糖原含量;检测CD3~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞百分比。【结果】与模型组比较,给予青钱柳叶水提物治疗之后,阴虚内热型糖尿病中医表征表现如背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等均有明显的改善(P0.05或P0.01),FBG、AUC、Urea含量和肝脏系数下降(P0.05或P0.01),肝糖原含量升高,CD8~+T细胞百分比升高,CD4~+T细胞百分比及CD4~+/CD8~+值下降(P0.05或P0.01)。【结论】青钱柳叶水提物能改善大鼠阴虚内热型2型糖尿病中医表征及调节免疫功能。     

广藿香醇抑制幽门螺杆菌脲酶活性及其机制

探讨广藿香醇对于幽门螺杆菌Helicobacter pylori脲酶活性的抑制及其相关基因的表达变化,为进一步研究广藿香醇对幽门螺杆菌定植感染的影响奠定基础。培养幽门螺杆菌并采用革兰染色、快速尿素酶及PCR的方法鉴定后,在酸性条件(pH 5.3)和中性条件(pH 7.0)培养液中给予不同浓度的广藿香醇干预1 h,应用琼脂稀释法测定细菌的存活率;Berthelot显色法检测细菌的脲酶活性;RT-qPCR法检测细菌中ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nix A相关脲酶基因的表达变化。经过鉴定生长良好幽门螺杆菌在不同浓度的广藿香醇干预后,细菌存活率没有明显变化;其脲酶活性出现了显著的下降;同时脲酶的相关基因ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nix A的表达均出现不同程度的降低。广藿香醇在酸性条件和中性条件下均可以抑制幽门螺杆菌脲酶的活性,可能与降低细菌脲酶相关的基因表达有关。