大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究

目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳。对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质。对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白。进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究。结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高, 在A型精原细胞则表达量极少。HSP70—2在粗线期精母细胞中表达量最大。用HSP70—2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应。HSP70—2主要表达于细胞质。结论 HSP70—2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

LM23调控细胞周期蛋白CDKs在大鼠精子发生过程中具有重要作用（摘要）

目的借助本研究室建立的活体LM23基因沉默大鼠动物模型,制备LM23蛋白的合成肽多克隆抗体和生物信息学等方法,研究LM23蛋白的功能。方法利用互联网公共信息数据库PROSITE,Protfun server,PSORT server和BLAST等生物分析工具软件对LM23进行生物信息学分析。     

战斗机女飞行员的航空医学问题

在海湾战争中,美国有近4万名女军人参加了战斗。在战斗机上、大型战舰上、以及海军陆战队中,她们承担了巨大的体力和精神负荷,达到了高标准的军事职业要求,从而也带来了一系列重要的医学保健问题。为此,美国国防部设立了“军队女性保健问题”专题研究小组,制定了“国防女性健康研究计划”,还设立了专门的医学研究基金。从1995年     

慢性肺原性心脏病的时间病理学研究

目的:通过对837例肺原性心脏病(肺心病)病例的回顾分析,得出肺心病急性发病、死亡的时间节律性,用以指导临床肺心病的防治.方法:将纳入病例的姓名、性别、年龄、病案号、入院时间、节气、农历月份,死亡病例的死亡时间、节气、农历月份等相关内容输入计算机,建立数据库(Access 2000),进行统计、分析,判断统计结果,从而找出肺心病发病及死亡的时间节律性.结果:(1)肺心病急性发病以农历11月、12月最多,节气以冬至、大寒、大雪最多;(2)死亡时间以农历3月、12月最多,节气以大寒、小寒、大暑、谷雨最多;(3)肺心病死亡时间一日以下午、后半夜最多.结论:肺心病急性发病、死亡具有明显的时间节律性.     

LM23基因降调激活Fas—FasL和线粒体通路使精母细胞凋亡

目的通过LM23基因RNA干扰（RNAi）动物模型，探讨LM23基因降调对大鼠生精细胞凋亡的影响。方法使用本实验室建立的LM23基因RNAi大鼠动物模型，分别通过苏木精-伊红染色（HE）和原位末端标记方法（TUNEL）检测LM23基因降调后生精细胞的凋亡发生情况；基因芯片技术，分析LM23基因降调后凋亡相关基因的差异表达；免疫组织化学技术检测LM23基因降调后caspase3蛋白分子在生精细胞中的表达。结果TUNEL结果显示，LM23基因降调后大晕精母细胞发生凋亡；基因芯片分析结果，LM23基因降调后Fas—FasL信号转导通路和线粒体信号转导通路被激活；免疫组织化学技术发现，LM23基因降调后，caspase3蛋白分子在大鼠睾丸精母细胞中的表达量显著增加。结论LM23基因降调后，呵能激活Fas—FasL信号转导通路和线粒体信号转导通路，从而导致大量精母细胞发生凋亡。     

男性不育基因的研究进展

生育相关基因的缺陷是引起男性不育的重要原因,综述近年新发现的男性不育相关基因,并介绍男性不育诊断、治疗等方面的新进展,对目前研究中存在的问题和发展前景也作了进一步的阐述和展望.     

β-肌动蛋白在大鼠精子发生过程中的特殊表达

目的:寻找大鼠精子发生相关蛋白,研究β-肌动蛋白在大鼠睾丸组织的表达和分布。方法:用牛血清白蛋白梯度沉降(STAPUT)法从9日龄雄性SD大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞;分别提取这3种细胞的总蛋白,进行双向电泳;对所得到的双向电泳图谱用Im ageM aster2D E lite图像分析软件分析,找出差异蛋白,对挑选出的差异蛋白做质谱分析。进一步用β-肌动蛋白抗体做免疫组化的睾丸组织定位研究。结果:在双向电泳图谱中,β-肌动蛋白在A型精原细胞、粗线期精母细胞中表达量较高,在圆形精子细胞中则表达量极少。免疫组化研究发现:A型精原细胞、粗线期精母细胞有阳性颗粒反应,圆形精子细胞则无阳性颗粒反应;在接近成熟的精子细胞中,呈现极强的阳性颗粒反应,并且越接近排放期的精子细胞,阳性反应越强。在接近成熟的精子头部,阳性颗粒反应最强。β-肌动蛋白主要在精原细胞和精母细胞的细胞质中表达;在接近成熟的精子细胞中主要表达在细胞核。结论:β-肌动蛋白在精子发生过程中有明显的阶段差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用

目的制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体,对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用。方法利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列。应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274-291个氨基酸多肽（接近C端）,经C18的RP—HPLC纯化后,通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价。通过Westernblot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位。结果化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20,第274-291个氨基酸多肽,纯化后两条多肽纯度都达到90％以上,符合免疫用抗原标准。将多肽与KLH交联,用于免疫动物。经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1：64000和1：128000。应用大鼠睾丸组织切片进行LM23—18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核。Westernblot研究证实,LM23—18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子萤（Mr）约为36kD的LM23蛋白。结论所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Westernblot及免疫组化研究。LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持。     

男性生殖相关基因功能研究策略

男性不育是较为常见的病症,约4％的男性受到不育的困扰。男性原发性不育与男性生殖相关基因的缺陷有密切关系。近年来,国内外发表了大量文献展示了新发现的与男性生殖相关的基因。刘美玲等在采用抑制性消减杂交技术（SSH）筛选大鼠精原细胞与精母细胞差异表达基因过程中,发现了大鼠睾丸特异表达基因LM23基因。沙家豪所在的重点实验室运用人胚胎和成人睾丸cDNA探针与人睾丸dDNA微阵列杂交,通过差异杂交的克隆进行序列测定和分析,     

磷脂酰乙醇胺结合蛋白在精子发生过程中的特异表达

目的运用蛋白质组学方法，寻找大鼠精子发生相关蛋白。方法用重力沉降法（STAPUT法）从9d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞，从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白，进行双向电泳。对所得到的双向电泳图谱进行分析，找出差异蛋白。对挑选出的差异蛋白做质谱分析。结果发现磷脂酰乙醇胺结合蛋白（RKIP）在这3种不同细胞的表达上有明显差异。在双向电泳图谱中，RKIP在圆形精子细胞中表达量较高，并且形成分子量相同但等电点不同的并排4个蛋白质点；而在A型精原细胞和粗线期精母细胞的双向电泳图中，RKIP仅为一个单独的蛋白质点。结论RKIP在精子发生过程中有明显的差异表达，可能对精子发生起重要调节作用。