“扶正”“祛邪”中药醇提物调控骨髓增生异常综合征细胞组蛋白乙酰化及TLR2表达诱导凋亡的体外研究

目的:探讨"扶正""祛邪"中药复方醇提物对骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及Toll样受体2(TLR2)表达的干预作用,分析其对细胞凋亡水平的影响。方法:收集MDS患者15例(正虚组10例、瘀毒组5例),正常组3例的BMMNCs进行体外培养。采用MTT法检测细胞毒性,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,real-time PCR、Western Blot分别检测中药醇提物干预后HDAC1、TLR2的mRNA及蛋白水平。结果:MDS患者HDAC1、TLR2基因及蛋白水平均高于正常人(P0.05),正虚型患者与瘀毒型患者组间未发现明显差异(P0.05);扶正、祛邪药对HADC1、TLR2和凋亡水平均有影响,但扶正药与祛邪药组间未发现明显差异(P0.05)。结论:组蛋白乙酰化相关表观遗传学异常和先天免疫失调均与MDS发病有关,有效扶正与祛邪中药复方醇提物对正虚、瘀毒型MDS细胞的组蛋白乙酰化和TLR2表达水平均具有调控作用,提示中药可能通过降低HDAC1水平调控TLR2表达,最终影响细胞凋亡。     

扶正、祛邪中药复方对骨髓增生异常综合征骨髓细胞红系转录因子水平调控的表观遗传学机制

目的:检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)红系转录因子(GATA-1),组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)的表达水平,分析经HDAC抑制剂(HDACI)伏立诺他(SAHA)、扶正、祛邪中药复方对不同证型MDS患者BMMNCs干预后的HDAC1,GATA-1表达变化,探讨MDS红系转录与表观遗传学组蛋白去乙酰化的可能关联性,以及扶正、祛邪中药对其干预的作用机制。方法:收集确诊MDS患者正虚组10例,瘀毒组5例以及正常组3例BMMNCs进行体外培养。采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测扶正、祛邪药物及SAHA干预前后HDAC1和GATA-1 mRNA和蛋白水平。结果:MDS患者GATA-1 mRNA和蛋白水平均低于正常人(P0.05),HDAC1mRNA和蛋白水平均高于正常人(P0.05),正虚型患者与瘀毒型患者间未发现明显差异;经HDACI(SAHA)干预后HADC1水平下降,同时GATA-1水平显著上升(P0.01),扶正、祛邪中药能上调各组GATA-1表达水平,下调HADC1表达水平(P0.01)。结论:表观遗传学组蛋白乙酰化与红系转录水平异常与MDS发病有关,扶正、祛邪中药对正虚、瘀毒型MDS患者BMMNCs的组蛋白乙酰化和GATA-1表达水平均具有调控作用。在MDS患者的BMMNCs中,HDAC1与GATA-1表达呈负相关趋势,可能存在经HDAC调控红系转录的信号通路,中药具有HDACI类似的干预作用,但扶正、祛邪中药间尚未发现明显差异。     

lncRNA RP11-297P16.4促进肺腺癌细胞侵袭及迁移的机制探讨

目的:探究长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）RP11-297P16.4对人肺腺癌细胞H1299和A549侵袭及迁移的影响。方法:利用qRT-PCR检测在肺腺癌细胞H1299、A549及人正常支气管上皮细胞HBEC 中RP11-297P16.4的相对表达水平;设计合成针对RP11-297P16.4的特异性shRNA,慢病毒感染建立稳定敲低lncRNA RP11-297P16.4的H1299、A549细胞;将其分为对照/H1299组、实验/H1299组、对照/A549组、实验/A549组,对照组感染shRNA-NC,实验组感染shRNA-RP11-297P16.4;qRT-PCR检测shRNA敲低效率;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测RP11-297P16.4对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2和-9的mRNA和蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,RP11-297P16.4在肺腺癌细胞中高表达,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.01）;qRT-PCR分析确定,shRNA敲低后RP11-297P16.4的mRNA表达水平显著降低(P＜0.001,P＜0.001);划痕实验表明24 h、48 h实验组细胞伤口愈合率均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01; P＜0.001,P＜0.001);Transwell小室检测结果显示,实验组细胞侵袭数量显著少于对照组,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.001）;qRT-PCR和蛋白印迹法结果显示,实验组细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白质表达量均低于对照组,差异具有统计学意义（均P＜0.05）。结论:lncRNA RP11-297P16.4 通过促进MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达来增强H1299、A549细胞的侵袭和迁移能力。