基于内质网自噬系统探究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎的防治作用

目的 研究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎（hyperlipidemia acute pancreatitis,HLAP）的防治作用及机制。方法 雄性C57BL/6J小鼠以高脂饮食喂养,ig泽泻汤干预8周后,ip雨蛙素（50 μg/kg）制备HLAP模型。采用试剂盒检测小鼠血清中三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）水平及淀粉酶（amylase,AMY）、脂肪酶（lipase,LPS）、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase,T-SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）活性;采用油红O染色观察肝脏组织脂质蓄积情况,苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏、胰腺组织病理学变化;采用Western blotting检测胰腺组织中血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）、核因子E2相关基因（nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2）、免疫球蛋白重链结合蛋白（binding immunoglobulin protein,BIP）、真核翻译起始因子2α（eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α）、p-eIF2α、Bcl-2相互作用蛋白（Bcl-2 interacting coiled-coil protein-1,Beclin-1）、自噬蛋白5（autophagy-related protein 5,ATG5）、自噬蛋白12（autophagy-related protein 12,ATG12）、微管相关蛋白1轻链3-II/I（microtubule-associated protein light chain 3-II/I,LC3-II/I）及溶酶体相关膜蛋白1（lysosomal associated membrane protein 1,LAMP-1）表达。采用棕榈酸（200 mmol/L）和雨蛙素（10 nmol/L）处理胰腺腺泡AR42J细胞构建HLAP细胞模型,给予泽泻汤干预后,采用试剂盒检测细胞培养上清液中LPS、T-SOD活性;采用DCFH-DA荧光探针、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）及MMP水平;采用透射电镜观察细胞超微结构及自噬变化;采用Western blotting检测细胞中HO-1、Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1）、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、LC3-II/I和LAMP-1表达。结果 与模型组比较,泽泻汤能够降低小鼠血清中TC、TG水平及AMY、LPS活性（P＜0.05、0.01、0.001）,抑制肝脏组织中的脂滴蓄积,减轻肝脏及胰腺组织病理损伤,同时上调血清及胰腺腺泡细胞中SOD、CAT活性（P＜0.05、0.01）,下调ROS水平（P＜0.001）,上调胰腺组织及细胞中HO-1、Nrf2、LAMP1表达（P＜0.05、0.01、0.001）,下调Keap1、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、ATG12及LC3-II/I表达（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 泽泻汤可以防治HLAP,其作用机制可能与抑制内质网应激诱导的过度自噬、恢复自噬通量有关。