荧光及磁示踪法观测脑组织液的引流分区特征

目的：对比光、磁两种探针示踪显示脑组织间隙(interstitial space, ISS)内分子扩散与团流运动的结果,研究脑组织液(interstitial fluid, ISF)在ISS内的分区引流特征。方法： 36只 SD大鼠随机分为荧光检查组(18只)和磁示踪组(18只),每组再随机分为尾状核(caudate nucleus, Cn)、丘脑(thalamus, T)和黑质(substantia nigra, Sn)3个亚组,每亚组6只。荧光检查组：参考脑立体定位图谱,选取冠状位苍白球为中心层面,以Cn、T和Sn为靶点进行穿刺定位,分别导入2 μL 10 mmol/L荧光黄(lucifer yellow,LY)于相应脑区的中心位置,于Cn 3 h、T 2 h和Sn 1 h对大鼠用4%(体积分数)多聚甲醛进行心脏灌注固定后,将取出的鼠脑置于脑切片模具中,沿视交叉向后切片,以进针位点所在的冠状切片为中心层面,计为1片,前取3片,后取2片,每片厚约1 mm,共6片待检测,应用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)对离体切片进行采集,测量离体切片LY扩散的面积;磁示踪组大鼠也以Cn、T和Sn为靶点进行穿刺定位导入2 μL 10 mmol/L钆喷酸葡胺(gadolinium-diethylene triamine pentaacetic acidm,Gd-DTPA), 应用磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)动态监测示踪剂在大鼠脑内的扩散,并利用Radiant软件测量Gd-DTPA的扩散面积。结果：LY与Gd-DTPA在Cn、T和Sn的ISS内扩散区域各不相同,Cn亚组LY与Gd-DTPA导入3 h后,比较1~6层LY与Gd-DTPA扩散面积为：(10.95±4.27) mm2 vs. (8.33±2.25) mm2、(18.16±4.74) mm2 vs. (16.42±2.88) mm2、(24.57±3.65) mm2 vs. (20.75±2.29) mm2、(34.81±3.32) mm2 vs. (28.88±1.51) mm2、(30.53±3.12) mm2 vs. (20.92±2.75) mm2、(12.15±4.92) mm2 vs. (10.00±1.89) mm2,对其在每层两组间扩散面积进行t检验,扩散面积差异均无统计学意义(t=0.940,P=0.400;t=0.546,P=0.614;t=1.534,P=0.200;t=2.809,P=0.480;t=2.693,P=0.055;t=0.707,P=0.518);T亚组中LY与Gd-DTPA导入2 h后,比较1~6层LY与Gd-DTPA扩散面积为： (5.56±4.61) mm2 vs. (3.33±2.25) mm2、(16.21±3.36) mm2 vs. (11.42±2.88) mm2、(19.00±5.21) mm2 vs. (15.75±2.29) mm2、(25.32±5.49) mm2 vs. (22.33±3.25) mm2、(17.34±5.31) mm2 vs. (15.92±2.75) mm2、(7.67±6.19) mm2 vs. (5.00±1.89) mm2,对其在每层两组间扩散面积进行t检验,差异均无统计学意义(t=0.753,P=0.493;t=1.875,P=0.134;t=0.990,P=0.378;t=0.810,P=0.464;t=0.413,P=0.701;t=0.716,P=0.514);Sn亚组LY与Gd-DTPA导入1 h后,比较1~6层LY与Gd-DTPA扩散面积为：(6.78±4.56) mm2 vs. (4.75±2.00) mm2、(12.65±5.04) mm2 vs. (10.44±1.13) mm2、(19.51±6.54) mm2 vs. (17.55±0.30) mm2、(28.72±5.45) mm2 vs. (24.48±1.32) mm2、(21.34±4.42) mm2 vs. (17.72±0.25) mm2、(13.00±5.46) mm2 vs. (12.00±2.88) mm2,对其在每层间扩散面积进行t检验,扩散面面积的差异均无统计学意义(t=0.705,P=0.519;t=0.743,P=0.499;t=0.517,P=0.656;t=1.310,P=0.260;t=1.416,P=0.292;t=0.281,P=0.793),但LY扩散面积略大于Gd-DTPA。结论： 荧光法证实了磁示踪法发现的ISF在ISS内的分区引流特征,并且可为磁示踪法提供离体验证的技术与方法。荧光ISS成像法具有更高的对比度和分辨率,得到了更加精细的ISF引流分区区域。     

纳米载体的理化性质对细胞学效应及抗肿瘤效果的影响

纳米颗粒作为抗肿瘤药物的理想载体,正受到越来越多的关注。近年来的研究发现,抗肿瘤纳米载药颗粒的粒径、形状、表面电荷等理化因素很大程度上影响细胞对载体的摄取及响应能力,进而影响药效的发挥。在微观细胞层面上理解载体理化性质的影响,可以有针对性地设计纳米药物输送体系,使药物获得理想的血液循环时间、肿瘤靶向能力和抗肿瘤效果。就目前的研究进展而言,纳米颗粒的功能特性、其他性质与生物学效应及抗肿瘤效果的相关研究依然存在一定的空白,并且抗肿瘤药物载体的设计也需要新的思路与方法。     

光、磁分子探针在脑组织间隙内的扩散分布规律

目的：对比荧光分子探针四甲基罗丹明-葡聚糖(dextran-tetramethylrhodamine, DT)和荧光黄(lucifer yellow CH, LY)、磁性分子探针钆-二乙三胺五乙酸(gadolinium-diethylene triamine pentaacetic acid, Gd-DTPA)在多孔介质中的动态扩散分布规律,筛选合适的荧光分子探针用于大鼠脑组织间隙(interstitial space, ISS)光学成像。方法：琼脂糖凝胶分为DT组、LY组、Gd-DTPA组,分别导入相应分子探针, 应用激光扫描共聚焦显微镜分别动态观察DT、LY在琼脂糖凝胶内的扩散分布,与磁共振成像显示的Gd-DTPA在琼脂糖凝胶内的动态扩散过程进行比较。LY分别导入18只大鼠尾状核,对不同时间点离体脑切片进行荧光成像,其成像数据与相应导入Gd-DTPA的大鼠的磁共振在体检测成像数据进行对比。结果：DT、LY及Gd-DTPA在琼脂糖凝胶中的扩散分布均表现为各向同性,平均扩散分布速率分别为：(0.07±0.02)×10^-2 mm²/s、(1.54±0.47)×10^-2 mm²/s、(1.45±0.50)×10^－2 mm²/s,DT与LY、DT与Gd-DTPA间差异均有统计学意义(ANOVA, F=367.15, P＜0.001; Post-Hoc LSD, P＜0.001),LY与Gd-DTPA间差异无统计学意义 (Post-Hoc LSD, P =0.091)。重复测量方差分析比较分子探针的扩散分布面积随时间变化的趋势：DT与LY、DT与Gd-DTPA间的变化规律差异均有统计学意义 (Bonferroni校正, α=0.0125, P＜0.001),LY与Gd-DTPA间差异无统计学意义 (Bonferroni校正, α=0.0125, P =0.203)。LY与Gd-DTPA在大鼠尾状核ISS内分布随时间变化呈各向异性,均表现为指向同侧皮层区的单方向楔形扩散,平均扩散分布速率分别为 (1.03±0.29)×10^－3 mm²/s和(0.81±0.27)×10^－3 mm²/s, t=0.759, P =0.490;信号衰减半衰期分别为 (2.58±0.04) h和(2.46±0.10) h, t=2.025, P =0.113。LY与Gd-DTPA间扩散分布面积比率在0.5、1、2、3、7 h差异无统计学意义(t=2.249, P=0.088; t=2.582, P=0.061; t=1.966, P=0.121; t=0.132, P=0.674; t=0.032, P=0.976),在11 h差异有统计学意义(t=2.917, P =0.043)。结论：LY与Gd-DTPA在多孔介质内的扩散分布规律一致,是ISS荧光成像的适用分子探针,可用于脑ISS的微观、宏观、离体检测。     

荆芥穗挥发油化学成分的研究

荆芥Schizonepetatenuifolia（Benth．）Briq．为唇形科一年生草本植物，其全草和穗加工后为中国药典收载的传统中药，用于感冒、头痛、麻疹不透等[1]。荆芥穗芳香气烈，祛风发汗作用较全草强烈。我国学者刘国声曾研究过河北省产的荆芥油，测出其挥发油含量为4.1％，并测定了物理常数[2]。尚未见到关于荆芥穗挥发油全分析的报道。我们对吉林省荆芥穗挥发油进行了提取、化学成分分析及主成分单体分离的研究。1提取及含量测定将于荆芥穗置于园底烧共中，加10倍水进行水蒸汽蒸馏，接收采取二次冷暖系统，经无水硫酸钠干燥后得一淡黄色油状液…     

基于生物介质的丙三醇对分子荧光强度影响的研究

目的：生物介质中加入丙三醇是一种保存荧光样品的重要方法,研究丙三醇含量对生物介质中不同发射波长荧光分子的荧光强度的影响。方法：以磷酸盐缓冲液（PBS）作为介质,测定不同丙三醇体积分数下的拓扑替康、磺酰罗丹明B（SRB）、吖啶橙（AO）和罗丹明B的荧光强度以及丙三醇的荧光光谱和紫外-可见吸收光谱。结果：研究发现丙三醇本身无荧光,但其能够增强上述荧光分子的荧光强度。随着丙三醇体积分数的增大,荧光分子的荧光强度逐渐增强。结论：生物介质中加入丙三醇后能够增强分子的荧光强度。选择含高体积分数丙三醇的生物介质,有利于提高荧光分子检测的灵敏度。