染镉对雌性大鼠卵巢、子宫雌激素受体及热休克蛋白90α表达的影响

目的研究镉对卵巢子宫内膜雌激素受体(ER)及HSP 90α表达的影响,探讨其内分泌干扰作用机制。方法40只成年雌性Wistar大鼠按体重分层随机分为4组,每组10只,镉(Cd2+)染毒剂量分别为0、1.25、2.5、5.0 mg Cd2+/(kg.d),皮下注射,每周5 d连续4周。于动情间期将大鼠处死;用免疫组化染色法观察卵巢间质和子宫内膜ER表达以及子宫内膜HSP 90α表达。结果高剂量组卵巢间质ER表达显著降低于其他各剂量组(P<0.05);各染毒组子宫内膜ER表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),其中高、中剂量组显著低于低剂量组(P<0.05);各染毒组子宫内膜HSP 90α表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验条件下,高剂量组染镉可使卵巢间质ER表达显著下降,而各染毒组子宫内膜ER表达与对照组比较差异无统计学意义,其在镉的内分泌干扰作用机制中镉对ER表达影响的意义值得进一步研究;镉不会通过增加子宫内膜HSP 90α的表达来干扰内分泌系统。     

新疆家蚕抗菌肽诱导人胃癌细胞AGS凋亡的研究

目的探讨新疆家蚕抗菌肽(cecropin XJ)是否通过诱导人胃癌细胞AGS凋亡产生抗肿瘤的作用。方法选择0.01~1 000 mg·L-1浓度范围内的cecropin XJ与人胃癌细胞AGS和人正常胃上皮细胞GES-1共培养24 h,采用MTT法检测cecropin XJ对AGS细胞和GES-1细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞超微结构变化;Hoechst染色观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧和线粒体膜电位的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3以及细胞色素C mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 Cecropin XJ在体外能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖(P<0.05),并具有浓度依赖性,IC50值为61.19 mg·L-1,但对GES-1细胞无明显的抑制增殖作用。经cecropin XJ处理24 h后,AGS细胞核固缩,呈现典型细胞凋亡特征,同时细胞内活性氧增加,线粒体膜电位下降。qRT-PCR和Western blot结果表明,cecropin XJ能够引起Bcl-2表达下调,Bax表达上调,促进细胞色素C的释放并活化caspase-3。Cecropin XJ促进caspase-3活性呈剂量依赖,经caspase-3和caspase-9特异性抑制剂处理后可降低cecropin XJ介导的AGS细胞死亡率。结论 Cecropin XJ可通过下调Bcl-2表达,上调Bax表达和活化caspase-3诱导AGS细胞凋亡,是其抗肿瘤机制之一。     

研究基因功能的RNA干扰技术

人类基因组计划的实施 ,使基因组大规模测序工作已深入开展 ,人类积累了大量的基因序列数据 ,而这些序列大部分缺乏明确的功能注释 ,随着后基因组时代的到来 ,加速基因功能的研究已成为当务之急。人们对于某个基因功能的认识一方面通过分离突变体与野生型进行比较来确定 ,另一方面通过如反义抑制、目的基因超表达导致的共抑制等反向遗传学方法获得。而RNAi以其可大规模确定基因功能的优点 ,使其成为高通量分析日益增多的“新”基因的有效手段。1　RNAi的发现及特点很长时间以来 ,RNA仅仅被认为或者是作为mRNA分子起作用 ,或者作为翻译…     

多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究进展

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocidaP.m)是有荚膜的革兰氏阴性杆菌,是普遍存在的致病菌能够引发动物的各类疾病,如牛和水牛的出血性败血症,猪的萎缩性鼻炎,兔的脓血症,野生和家养鸟类的禽霍乱,以及人类各种与动物叮咬有关的疾病,包括皮下感染、脓毒性的关节炎、脑膜炎、心内     

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。     

不同途径的乳球菌介导重组IL-12基因抗小鼠黑素瘤的效果

利用自身免疫系统或其组分治疗肿瘤是一种新的治疗手段.白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)是一种具有多种生物学活性的免疫调节因子,它可以促进NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)的活性,能刺激T细胞及NK细胞的增殖,并诱导分泌IFN-γ等多种细胞因子[1],因此在抗肿瘤及抗感染中起重要作用.与其他细胞因子一样,直接应用IL-12会导致全身不良反应甚至危及生命.2003年Huber等[2]发现通过滴鼻给药可以降低IL-12介导的不良反应,此外有研究表明利用质粒、腺病毒或腺病毒转染的间质干细胞靶发送IL-12基因到肿瘤部位表达也能抑制肿瘤生长[3-5],而不致产生严重的不良反应.然而质粒发送存在缺乏组织的特异性和靶向性、转染效率较低且基因表达时间短[6]等缺点,发送重组腺病毒载体易导致转染细胞毒性及死亡、基因表达时间受限、可诱导机体产生免疫反应[7]等,限制了这些方式临床应用的效果.     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子调控树突状细胞发育和功能的研究进展

树突状细胞(DC)是重要的抗原提呈细胞,专门负责抗原捕获、加工并提呈给下游T淋巴细胞从而诱导免疫应答或者免疫耐受。维持DC亚群在体内的动态平衡是保证机体免疫系统正常运转的基础。无论机体处于炎症或静息状态,粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对DC亚群发育、分布、功能及维持DC亚群动态平衡均具有重要的调控作用。本文主要综述了GM-CSF对DC亚群发育与功能的调控作用。阐明DC发育与功能的调控机制,有助于开发新的基于DC的免疫治疗方案。     

动物线粒体DNA的研究现状及其在啮齿动物遗传结构中的应用

自 1963年Nass通过电镜证实了线粒体DNA的存在以来 ,国内外许多学者对一些高等动植物尤其是动物线粒体DNA(MitochondrialDNA ,mtDNA)进行了多种研究 ,在mtDNA的结构、组成、复制、转录、基因表达的调控及mtDNA突变与线粒体病之间的关系 ,以及在分子基础上揭示或重新认定了许多动物的起源和分类 ,为动物的亲缘关系的认定以及遗传育种提供了大量的背景资料[1～ 3 ] 。近年来 ,随着限制性片段长度多态性 (Restrictionfregmentlengthpolymorphism ,RFLP)分析技术及PCR技术的发展和应用 ,mtDNA进化遗传学研究成为目前分子进化研究领…     

酵母系统表达疾病相关蛋白的研究

随着分子生物学技术的发展 ,利用生物工程技术表达药用蛋白、生物活性蛋白已成为一种有潜在发展前景的生产方式 ,如全世界用于治疗糖尿病的胰岛素 ,大约有一半的用量是由酿酒酵母表达出来的。ThomasKjeldsen等用毕赤巴斯德酵母表达出了有活性的与人类天然胰岛素结构相同的胰岛素[1] 。与传统的原核表达系统相比 ,酵母真核表达系统具有易培养、繁殖快及真核细胞对翻译后蛋白的加工及修饰过程 ,如二硫键的正确形成 ;前体蛋白的水解加工 ;糖基化作用等 ,并且能将表达的蛋白产物分泌到细胞外的培养基中 ,简化了表达产物的回收和纯化 ,有利于蛋…     

小鼠卵透明带3基因疫苗体外瞬时表达的研究

运用基因重组技术，将小鼠ZP3 cDNA片段克隆到真核表达载体pCDNA3上，成功构建了pCDNA3-ZP3真核表达质粒，转染HeLa细胞后，ELISA法检测到pCDNA3-ZP3真核表达质粒在HeLa细胞瞬时表达系统中能够特异性表达ZP3蛋白，结果表明pCDNA3-ZP3真核表达质粒能够作为基因疫苗用于小鼠免疫接种的研究。