基于p53/AMPK信号通路观察益气扶正解毒汤对A549细胞自噬水平和生长的影响

目的 探讨益气扶正解毒汤对A549细胞自噬水平和生长的作用及机制。方法 制备益气扶正解毒汤含药血清干预A549肺癌细胞。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）,自噬关键分子酵母Atg6同系物1（Beclin1）,p62,p53蛋白和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）,磷酸化AMPK（p-AMPK）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白的水平,免疫荧光（IF）检测微管相关蛋白1A/1B轻链3B（MAP1LC3B）蛋白水平,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EDU）染色、侵袭实验（Transwell）和β-半乳糖苷酶染色分别检测含药血清对细胞增殖、侵袭、衰老情况的影响;设置自噬抑制剂甲基腺嘌呤（3-MA,5 mmol·L^-1）干预组,即分为10%胎牛血清组（空白组）,10%正常血清组（正常组）,10%含药血清低、中、高剂量组,10%高剂量含药血清加3-MA（高剂量+3-MA）组,检测各组细胞增殖、侵袭、衰老水平;并设置p53抑制剂（PFT-α, 10 μmol·L^-1）组,即分为正常组,PFT-α组,高剂量组,高剂量+PFT-α组,检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1表达水平和MAP1LC3B免疫荧光强度及各组细胞增殖、侵袭、衰老的情况。结果 与空白组、正常组比较,干预A549细胞48 h,益气扶正解毒汤中、高剂量组LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平呈剂量依赖性升高（P<0.01）;益气扶正解毒汤低、中、高剂量组p62,p-mTOR/mTOR蛋白下降（P<0.05,P<0.01）,p53,p-AMPK/AMPK蛋白表达升高（P<0.01）;益气扶正解毒汤低、中、高剂量组A549细胞增殖、侵袭数量明显降低,细胞衰老数量显著增多（P<0.01）,同时MAP1LC3B免疫荧光强度增强,且益气扶正解毒汤高剂量组效果最佳;与益气扶正解毒汤高剂量组比较,益气扶正解毒汤高剂量+3-MA组、益气扶正解毒汤高剂量+PFT-α组发生增殖、侵袭的细胞数量均增加,而发生衰老的细胞数量明显减少（P<0.05,P<0.01）,同时,高剂量+PFT-α组的MAP1LC3B免疫荧光强度减弱及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）。结论 益气扶正解毒汤可经p53/AMPK信号通路上调A549细胞自噬水平,进而抑制A549细胞增殖、侵袭迁移,促进细胞衰老,在抑制肺癌进展中具有重要作用。     

益气养阴类方药对肺癌放化疗增效减毒作用机制的研究进展

<正>肺癌是起源于肺部支气管黏膜或腺体的恶性肿瘤,早期症状多为咳嗽,常表现为阵发性、刺激性干咳,无痰或少痰,部分患者甚至无任何症状,故多数患者确诊时已为晚期。对于肺癌的治疗通常具有分期特异性,早期患者在无手术禁忌证时应予以手术完全切除,对于晚期患者则应考虑常规放化疗及靶向治疗。而此类治疗在杀死体内癌细胞的同时,也不同程度地抑制了正常细胞的功能,且机体出现一系列不良反应,如免疫功能下降、骨髓抑制、肝肾毒性、皮疹等。中医药疗法从整体观出发,