蜜炙黄芪黄酮与皂苷有效部位的提取分离及对NO分泌水平的影响

目的 建立高效、简便的方法对蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位进行分离,并探究二者对NO分泌水平的影响.方法 采用Poly-Sery HLB固相萃取(Poly-Sery HLB SPE)法对蜜炙黄芪醇提物中的黄酮与皂苷部位进行分离,以UPLC/Q-TOF-MS对分离所得蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位进行定性定量分析.通过脂多糖体外诱导小鼠RAW264.7细胞建立炎症模型,采用MTT法检测蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位的细胞毒性作用,采用Griess法检测蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位作用后炎症细胞内NO的表达水平. 结果 Poly-Sery HLB SPE能很好地富集与分离蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位,使得二者相对质量分数达到96.59%、95.06%.蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位对RAW264.7细胞NO分泌释放均具有显著的抑制作用,炎症模型组的NO释放量为5.28 μmol/L,蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位给药组的NO释放量分别为2.31 μmol/L与2.01 μmol/L. 结论 Poly-Sery HLB SPE法能高效分离蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位;蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位均能有效抑制炎症模型细胞NO的释放,推测具有抗感染免疫活性.     

脾气虚证大鼠尿液生物标记物的识别及其生物学意义

考察脾气虚证大鼠尿液小分子代谢组成分,寻找脾气虚证的标记物,阐明其与代谢通路之间的联系。采用劳倦伤脾加限制饮食的方法构建大鼠脾气虚证动物模型,分别进行D-木糖吸收实验及血常规检测。收集的尿液采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析,尿液代谢指纹图谱数据集进行主成分分析(PCA)和正交偏最小-判别分析(OPLSDA)等统计学分析,筛选脾气虚证的生物标记物。D-木糖和血常规测定结果表明脾气虚证大鼠造模成功。正、负离子模式下的PCA,OPLS-DA得分图显著区分模型组和空白组。根据OPLS-DA分析的S-plot图、VIP值、t检验及受试者特征曲线ROC下的面积(AUC),筛选并鉴定出苯丙氨酸、琥珀酸、乌头酸、异柠檬酸、甜菜碱、犬尿酸、吲哚、肌酸、肌酸酐、乳清酸、黄嘌呤、黄嘌呤酸等24个脾气虚证相关的生物标记物,主要涉及能量代谢、氨基酸代谢、色氨酸代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢。尿液代谢组学方法结合在线软件包进行数据处理解析代谢通路,可为脾气虚证及其他中医证候的研究提供新的方法和思路。