活体生物发光示踪术观察中国被毛孢抑制小鼠4T1-luc乳腺癌肺转移作用

[目的]利用活体生物发光成像技术,探讨中国被毛孢菌丝体对小鼠乳腺癌肺转移的影响。[方法]4T1-luc乳腺癌细胞原位接种于50只BALB/c小鼠2周后,取40只荷瘤小鼠,分成4组,即模型组(10mL.kg-1NS)、HSM低剂量组(1.0g.kg-1HSM)、HSM高剂量组(2.0g.kg-1HSM)、阳性组(20mg.kg-1CTX),每组10只,连续给药21d;测定各组小鼠原位肿瘤体积和重量,并用活体生物发光成像仪观察各组小鼠乳腺癌肺转移情况。[结果]小鼠灌胃给予1.0g.kg-1、2.0g.kg-1HSM后,原位肿瘤体积和重量明显降低(P<0.05,P<0.01),原位肿瘤抑瘤率分别为22.92%和32.50%;给予2.0g.kg-1HSM的小鼠乳腺癌肺转移明显减少(P<0.01),乳腺癌肺转移的抑制率为51.77%。[结论]中国被毛孢菌丝体具有较好的抑制小鼠乳腺癌肺转移作用。     

不同因素致亚健康大鼠血液生化、血气电解质指标的影响

目的观察不同因素致亚健康模型大鼠血液生化和血气电解质指标的变化。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为5组,即多因素(MF)组、热水游泳(WS)组、睡眠不足(SD)组、单纯束缚(PC)组和正常对照(C)组,每组12只。采用热水游泳、睡眠剥夺和单纯束缚等单因素或多因素联合建立亚健康大鼠模型,各组造模5d后,处死6只,剩余动物进行恢复性饲养3 d后处死。分别测定造模结束后和恢复3 d时大鼠的血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、血糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和血气电解质等指标。结果 (1)与正常对照(C)组比,造模5d后MF组的大鼠BUN和TG水平显著降低(P<0.05,P<0.01),同时CREA、AST、CK、CK/AST和LDH水平显著升高(P<0.01),WS组的大鼠TC、CK、CK/AST和LDH水平亦升高显著(P<0.01),且各模型组的大鼠GLU浓度明显增加(P<0.01);恢复3 d后,MF组的大鼠TC、AST、ALT、ALB、BUN、CK、CK/AST和LDH水平均明显高于C组(P<0.05,P<0.01);WS组的大鼠血清AST、CK、CK/AST比值和LDH水平亦显著高于C组(P<0.01),SD组的大鼠CK显著高于C组(P<0.05);(2)与C组比,造模5d后MF组、SD组和PC组的大鼠PCO2、Hct和Hb均明显升高(P<0.05,P<0.01),WS组Hct和Hb升高显著且Na+显著降低(P<0.01),MF组的大鼠PO2和SO2%均显著降低且K+明显升高(P<0.05),且各造模组的大鼠HCO3-♂的浓度均显著升高(P<0.05,P<0.01);恢复3 d后,除各造模大鼠的血液pH值和PO2均明显下降(P<0.05,P<0.01)外,MF组、SD组和PC组的大鼠PCO2升高并伴有SO2%的降低(P<0.05,P<0.01),MF组和WS组Na+仍明显低于C组(P<0.05,P<0.01),SD组的大鼠K+和Mg2+则明显高于C组(P<0.05,P<0.01)。结论不同因素诱导的亚健康状态大鼠的血液生化、血气电解质指标均出现了不同程度上的改变,故血液生化和血气电解质指标能有效评估亚健康状态机体血液微环境的改变。     

不同品种实验兔虹膜酪氨酸酶基因序列和表达量的变化

目的从酪氨酸酶基因序列和表达量两个方面探讨酪氨酸酶与家兔虹膜颜色表型的关系。方法通过PCR扩增和测序检测4个具有不同颜色性状的家兔品种的酪氨酸酶基因外显子序列多态性;通过荧光定量PCR检测酪氨酸酶基因表达水平。结果白化品种日本大耳白兔和獭兔的TYR基因序列在第1118个碱基处都由C突变为A,并导致编码蛋白在373位,即最后一个N-糖基化位点发生由Thr到Lys的突变。白毛黑眼兔和青紫兰兔在第870个碱基处全部发生由A到T的无义突变。在白毛黑眼兔种群的所有个体和獭兔种群的部分个体中都发现TYR基因序列在第91个碱基处发生G到A的突变,导致氨基酸序列第31位处Val到Met的变异。经内参基因GAPDH的校正,TYR基因在白毛黑眼兔和青紫兰兔中表达水平显著高于在日本大耳白兔和獭兔中的表达水平(P0.01)。而在白毛黑眼兔和青紫兰兔之间、日本大耳白兔和獭兔之间,TYR基因的表达差异没有显著性。结论家兔TYR基因突变可能大幅度降低TYR基因表达,导致酪氨酸酶功能低下,从而影响虹膜颜色表型。     

WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔遗传多样性的RAPD分析

目的 应用随机引物扩增多态性DNA技术 （random amplified polymorphic DNA,RAPD） 对大耳白黑眼兔（white hair black eyes rabbit,WHBE rabbit）、日本大耳白兔（Japanese white rabbit,JW rabbit）和新西兰兔（New Zealand white rabbit,NZW rabbit） 3个实验兔品系进行遗传分析。方法 选用90只实验兔的皮肤组织样品提取基因组DNA,用60个随机引物对实验兔基因组DNA进行PCR扩增,根据电泳结果筛选出多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析,再利用Popgene 3.2统计软件对3个品系的扩增条带进行遗传分析,获得实验数据。结果 分析结果表明：（1） 60个随机引物中筛选出25个多态性较高的引物,3个品系实验兔共检测到493个扩增片段,长度在100 ~1800 bp之间,筛选的25个引物中,其中16个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出WHBE兔特有的特征条带;（2） WHBE兔位点数为234个,其中多态位点数166个,多态位点比为70.94%,JW兔位点数为228个,其中多态位点数122个,多态位点比为53.51%,NZW兔位点数为231个,其中多态位点数94个,多态位点比为40.69%;（3） 三个群体的Shannon多样性指数分别为0.3385,0.2222和0.1905;（4） JW兔和NZW兔的遗传相似系数最高,为0.8443,其次为WHBE兔和JW兔的遗传相似系数,为0.8204,WHBE兔和NZW兔的遗传相似系数最低,为0.7862。结论 结果表明WHBE兔与JW兔和NZW兔之间有遗传的相似性,也存在着遗传差异,应用RAPD技术可以很好地检测实验兔不同品系之间以及同一品系不同个体之间的亲缘关系。     

雷公藤醋制后对体外生物活性影响的实验研究

目的：研究雷公藤醋制后的体外生物活性。方法通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测雷公藤醋制后对小鼠脾淋巴细胞、L-02肝细胞和绿猴肾细胞（cos-7）增殖的影响。结果雷公藤醋制饮片对小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用优于空白组（P〈0.05，n=6）；雷公藤醋制饮片对L-02人肝细胞和cos-7肾细胞的增殖抑制作用均小于未醋制的雷公藤（P〈0.05，n=6）。结论雷公藤醋制具有减毒作用，但仍然保持较强的免疫抑制活性。     

应用微卫星标记研究Dunkin Hartley豚鼠封闭群的遗传背景

目的 检测我国现有Dunkin Hartley 豚鼠封闭的遗传背景,分析评估其遗传多样性水平和遗传分离情况,为建立标准化的豚鼠封闭群监测方法提供基础资料.方法 应用筛选获得的8个微卫星位点,从一个数量为1000的豚鼠封闭群中随机选择72个个体,通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,进行等位基因检测.并根据检测结果分析评估了该豚鼠封闭群的遗传现状.结果 共检测到28个等位基因,每个座位的等位基因数为2～5个,有效等位基因数为1.5191～3.4422,平均2.3093.平均期望杂合度为0.5294.各位点多态信息含量在0.3154～0.6545之间,平均值为0.4687.有5个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡.结论 豚鼠封闭群的遗传多态性处于中等水平,遗传平衡检测结果提示种群的繁殖过程未能实现完全随机交配,近交现象一定程度上存在.本研究的结果将为豚鼠封闭群遗传监测方法和标准的建立提供基础.     

黄芩素诱导乳腺癌细胞自噬

目的:考察黄芩素诱导乳腺癌细胞的自噬作用,并初步探讨其机制。方法:采用MTT实验考察黄芩素对乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞活力的影响,确定给药剂量。Western blot检测黄芩素(25、50和100μmol/L)及联合自噬抑制剂3-MA作用下,MCF-7细胞和4T1细胞中自噬特征蛋白LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的表达水平,流式细胞术Annexin V/PI双染法观察3-MA对黄芩素诱导MCF-7细胞和4T1细胞凋亡的影响,确认黄芩素诱导自噬的作用。通过Western blot考察自噬信号通路相关蛋白p-mTOR、mTOR、p-AKT和AKT的蛋白水平,结合AKT-mTOR激活剂EGF明确AKT-mTOR通路在黄芩素诱导乳腺癌自噬中的作用。结果:50μmol/L及其以上剂量的黄芩素可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞的活力,其作用具有显著的时效和量效性。Western blot结果表明,50和100μmol/L黄芩素作用下MCF-7细胞和4T1细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例显著增强,3-MA加入后又明显降低。流式细胞术结果显示,相比黄芩素单用组,联合自噬抑制剂可促进MCF-7细胞的坏死和凋亡。通路蛋白研究表明mTOR和AKT总量不变,其活化蛋白水平在黄芩素作用下显著降低,而加入EGF后又再次增加。结论:黄芩素可通过抑制AKT-mTOR通路诱导乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞自噬。     

不同血瘀造模对B16荷瘤鼠肝转移模型的影响

目的 比较不同血瘀造模对B16荷瘤鼠肝转移模型的影响.方法 取60只6周龄雌性C57BL/6J小鼠,随机分为正常对照组、单纯荷瘤组、BS1(利血平法)组、BS2(游泳复合高分子右旋糖酐法)组、BS3(寒凝复合肾上腺素法)组和BS4(地塞米松复合肾上腺素法)组,首先根据中医理论用不同造模方法形成血瘀模型,然后经脾接种B16黑色素瘤建立肝转移模型.用激光多普勒观察小鼠耳廓微循环变化,并在接种后第15天小鼠眼眶取血,检测红细胞免疫功能和血清唾液酸酶(SA)含量的变化,并麻醉处死动物,观察肝转移情况.结果 ①单纯荷瘤组和各血瘀荷瘤组小鼠的耳廓微循环血流均明显减少(P＜0.01),以BS2组降低显著.②单纯荷瘤组和各血瘀荷瘤组小鼠的红细胞免疫功能亦明显降低(P＜0.01),血清SA含量显著升高(P＜0.05,P＜0.01),以BS2和BS3组变化明显.③肝转移发生率:单纯荷瘤组、BS2组和BS3组均为100%,BS1组为80%,BS4组为60%,肝转移抑制率:BS2组、BS3组、BS1组和BS4组分别为-71.76%、3.90%、16.42%、100.6%.④荷瘤鼠肝转移的肝重与其耳廓微循环血流、红细胞免疫功能和唾液酸酶含量具有显著的相关性(P＜0.05,p＜0.01).结论 不同血瘀造模对B16荷瘤鼠肝转移模型肝转移发生程度具有明显的影响,应注意血瘀模型的选择,且其与红细胞免疫功能低下有关.     

解毒化浊方对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响

目的观察解毒化浊方血清对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响,探讨解毒化浊方治疗HER-2阳性乳腺癌的作用机制。方法将雌性Wistar大鼠分为对照组、中药组、西药组、联合组4组,分别给药制备含药血清,再以给药血清干预SK-BR-3细胞,采用Western blot检测HER-2、p-HER-2蛋白表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad、p-Bad表达。结果 Western blot检测显示,中药组、西药组、联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组均降低;西药组、联合组HER-2、p-HER-2、p-Akt灰度比较对照组明显降低,西药组、联合组较对照组HER-2、p-HER-2、p-Akt表达含量差异有统计学意义(P0.05)。中药组、西药组、联合组Bad、p-Bad灰度比较对照组降低,总Bad表达含量各组间差异无统计学意义(P0.05)。西药组、联合组p-Bad表达含量差异有统计学意义(P0.05)。结论解毒化浊方具有下调PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达,协同抑制剂发挥减毒增效的抗肿瘤作用。     

续断“发汗”前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞增殖的影响

目的探讨续断"发汗"前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、成骨细胞增殖的影响。方法将人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞分别与续断"发汗"前后水煎液及大鼠含药血清共同培养。MTT法检测细胞增殖,硝基苯磷酸盐法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。结果续断水煎液和含药血清均能显著促进MG-63细胞和成骨细胞增殖(P0.01),并能显著提高成骨细胞的ALP活性(P0.01),且相同剂量未"发汗"组作用普遍优于或非劣于"发汗"组。结论结合前期成分研究,推断续断"发汗"前后成分的改变影响了其促进细胞增殖和分化的作用,为其进一步研究奠定基础。