蛔虫抗菌肽在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

目的在毕赤酵母表达系统中表达蛔虫抗菌肽cecropin P1并检测其生物活性。方法根据毕赤酵母的密码子偏好性,人工设计并合成3条cecropin P1基因寡核苷酸片段,通过PCR扩增得到cecropin P1基因,构建重组载体pMD18-T-CecP1。双酶切pMD18-T-CecP1,将cecropin P1基因克隆到载体pPICZα-A信号序列α-因子之后,构建酵母分泌表达载体pPICZα-A-CecP1,用SacⅠ将其线性化后转化毕赤酵母X-33,采用Zeocin抗性筛选阳性菌株并进行诱导表达,发酵上清进行SDS-PAGE分析,抑菌试验鉴定其抑菌活性。结果获得酵母分泌表达载体pPICZα-A-CecP1。SDS-PAGE证实pPICZα-A-CecP1/X-33甲醇诱导产物的分子质量单位为6.3 ku。表达产物对大肠埃希菌DH5α的生长有抑制作用。结论应用毕赤酵母表达系统能表达cecropin P1。该抗菌肽具有抑菌作用。     

我国不同疫区杜氏利什曼原虫ITS-1片段序列的多态性分析

目的确定rDNA的内转录间隔区Ⅰ(ITS-1)是否可作为我国杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)分类的分子遗传标记。方法对我国不同疫区杜氏利什曼原虫分离株(L.d.SD1、L.d.SC7、L.d.XJ3、L.d.JS12)的ITS-1进行PCR扩增、克隆、测序,并分析它们的ITS-1序列多态性。结果 4个不同疫区的利什曼原虫分离株(L.d.SD1、L.d.SC7、L.d.XJ3、L.d.JS12)经PCR均扩增出一条约320bp的ITS-1片段,其序列大小分别为:317bp、323bp、317bp、316bp。序列分析表明:序列之间在多处位点发生了不同类型的突变,存在明显的序列多态性,其中伽师县突变的频率最为频繁,序列多态性最为显著。结论 ITS-1可以作为Leishmania donovani种内分类的分子遗传标记,有利于我国内脏利什慢原虫病的防治、诊断和治疗。     

苏氏接骨胶囊对胫骨干骨折大鼠模型促早期愈合作用及BMP-2表达的影响

[目的]探讨苏氏接骨胶囊（简称Su）对大鼠胫骨干骨折早期愈合的促进作用及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）表达的影响。[方法]36只6周龄雄性SD大鼠按照随机数字表分为假干预组、Su剂量140 mg/（kg·d）组（Su-140组）和Su剂量280 mg/（kg·d）组（Su-280组）。分组建立胫骨干闭合骨折髓内钉固定模型,术后第2天开始给予相应的药物干预。造模后10 d,过度麻醉心脏取血并处死各组大鼠。对大鼠患肢胫骨进行取材后,通过X线对骨折愈合情况进行初步检查;通过Micro-CT技术计算骨痂的骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）,并对骨痂进行组织形态学观察;通过免疫组化技术观察骨痂中BMP-2的表达,实时荧光聚合酶链反应（Real Time-PCR）定量检测血清BMP-2的含量。[结果]骨折造模术后10 d,假干预组、Su-140组及Su-280组3组大鼠的骨折断端均可见骨痂形成,骨折端愈合尚稳定,部分标本骨折断端稍有微动。经X线观察Su-280组骨折端愈合情况好于Su-140组及假干预组,Su-140组优于假干预组。Micro-CT检测结果提示,Su-140组和Su-280组的BV/TV值均高于假干预组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。Tb.Th和Tb.N 2个参数,Su-140组与假干预组间比较无统计学意义（P>0.05）,Su-280组与假干预组间比较有统计学差异（P<0.01）,Su-140组与Su-280组间比较有统计学差异（P<0.01或P<0.05）。免疫组化结果显示,Su-280组骨痂内有大面积的BMP-2表达区域,Su-140的表达区域较少,假干预组更少;RealTime-PCR结果显示,3组间BMP-2的含量差异存在显著性（P<0.05）,其中Su-280组与Su-140组和假干预组差异均有显著性（P<0.05）,Su-140组和假干预组间差异无显著性（P>0.05）。[结论]苏氏接骨胶囊能促进大鼠胫骨干骨折的早期愈合及BMP-2的表达,且随药物浓度的增加,骨折愈合越快,其机制可能为Su促进BMP-2的表达,进而诱导成骨细胞及胞外基质的分化增殖,促进骨形成及骨愈合。     

新疆喀什地区利什曼原虫人群感染率调查

目的了解现阶段新疆喀什地区人群利什曼原虫感染现状,为制定防治规划提供依据。比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能。方法选取2009年9月新疆喀什地区黑热病流行严重的1县3乡四个调查点,在当地疾病预防控制中心的帮助下,采集黑热病患者及其家属和邻居的血液样品,分别编号,每份血样分抗凝血和非抗凝血。采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体;用两组PCR引物RV1、RV2和K13A、K13B检测血样中利什曼原虫特异DNA片段。结果PCR法阳性检出率为82．67％,ELISA法阳性检出率为69．33％。结论现阶段新疆喀什地区黑热病感染率仍然颇高,尤其表现在与患者密切接触的的患者家属和邻居;PCR是检测无症状感染较敏感的方法。     

四川省黑水县利什曼原虫家犬感染率的检测

目的 了解四川省黑水县利什曼病流行区家犬的利什曼原虫感染现状,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能.方法 2009年5月在犬源型利什曼病疫区四川省黑水县随机选取的无内脏利什曼病现症的家犬,采集静脉血,采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体,用两组PCR引物RV1、RV2和K13A、K13B检测血样中利什曼原虫特异DNA,并比较两种检测方法的敏感性.结果 PCR法检测抗凝静脉血阳性检出率为30.47%(32/105),ELISA法检测血清阳性检出率为19.05%(20/105).结论 四川省黑水县存在大量的利什曼原虫无症状感染犬,PCR是检测无症状感染较敏感的方法.     

苏氏接骨胶囊对胫骨干骨折大鼠模型促早期愈合作用及BMP-2表达的影响

[目的]探讨苏氏接骨胶囊(简称Su)对大鼠胫骨干骨折早期愈合的促进作用及骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达的影响。[方法] 36只6周龄雄性SD大鼠按照随机数字表分为假干预组、Su剂量140 mg/(kg·d)组(Su-140组)和Su剂量280 mg/(kg·d)组(Su-280组)。分组建立胫骨干闭合骨折髓内钉固定模型,术后第2天开始给予相应的药物干预。造模后10 d,过度麻醉心脏取血并处死各组大鼠。对大鼠患肢胫骨进行取材后,通过X线对骨折愈合情况进行初步检查;通过Micro-CT技术计算骨痂的骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N),并对骨痂进行组织形态学观察;通过免疫组化技术观察骨痂中BMP-2的表达,实时荧光聚合酶链反应(Real Time-PCR)定量检测血清BMP-2的含量。[结果]骨折造模术后10 d,假干预组、Su-140组及Su-280组3组大鼠的骨折断端均可见骨痂形成,骨折端愈合尚稳定,部分标本骨折断端稍有微动。经X线观察Su-280组骨折端愈合情况好于Su-140组及假干预组,Su-140组优于假干预组。Micro-CT检测结果提示,Su-140组和Su-280组的BV/TV值均高于假干预组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。Tb.Th和Tb.N 2个参数,Su-140组与假干预组间比较无统计学意义(P0.05),Su-280组与假干预组间比较有统计学差异(P0.01),Su-140组与Su-280组间比较有统计学差异(P0.01或P0.05)。免疫组化结果显示,Su-280组骨痂内有大面积的BMP-2表达区域,Su-140的表达区域较少,假干预组更少;RealTime-PCR结果显示,3组间BMP-2的含量差异存在显著性(P0.05),其中Su-280组与Su-140组和假干预组差异均有显著性(P0.05),Su-140组和假干预组间差异无显著性(P0.05)。[结论]苏氏接骨胶囊能促进大鼠胫骨干骨折的早期愈合及BMP-2的表达,且随药物浓度的增加,骨折愈合越快,其机制可能为Su促进BMP-2的表达,进而诱导成骨细胞及胞外基质的分化增殖,促进骨形成及骨愈合。     

蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对杜氏利什曼原虫杀伤作用的研究

目的 研究蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对杜氏利什曼原虫的抑杀作用,探讨此抗菌肽可作为治疗黑热病的药物的可能性.方法 培养利什曼原虫至适当浓度,接种于96孔组织培养板中,设实验组和对照组,实验组分别加入10μl浓度为30、60、90、120、150、180μg∥ml的蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液,每个浓度重复9孔,对照组加...     

蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对骨髓瘤细胞杀伤作用的效果观察

目的观察蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对于骨髓瘤细胞杀伤作用的效果。方法培养骨髓瘤细胞至对数生长期,调整细胞浓度为(3～5)×105/ml,接种于96孔组织培养板中,100μl/孔,于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养24h。设实验孔、空白对照孔和5-FU阳性对照孔。实验孔分别于10μl对数生长期骨髓瘤细胞中加入蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液至终浓度分别为30、60、90、120、150、180μg/ml,每个浓度重复9孔,5-FU阳性对照孔终浓度为400μg/ml。连续培养24、48和72h后,采用MTT法检测各浓度蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液对骨髓瘤细胞的杀伤效果。结果蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对骨髓瘤细胞SP2/0有杀伤作用,发酵产物浓度为150μg/ml时,杀伤作用最大,杀伤率最大为78.845%,相当于400μg/ml的5-FU对骨髓瘤细胞SP2/0的杀伤作用。结论蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对于骨髓瘤细胞具有杀伤作用。