白藜芦醇对子宫内膜癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响

[目的]探讨白藜芦醇对子宫内膜癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及机制.[方法]采用子宫内膜癌Ishikawa细胞接种于裸鼠右腋部皮下建立子宫内膜癌荷瘤裸鼠模型,将30只建模成功的裸鼠分为模型组、顺铂组和白藜芦醇低、中、高剂量组,每组6只.顺铂组给予顺铂2 mg/kg腹腔注射,白藜芦醇低、中、高剂量组分别给予2.5、5、10 mg·...     

1,3-O,N螺杂环类乙酰肝素酶抑制剂对子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用

目的：通过观察乙酰肝素酶（HPA）抑制剂对子宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用及HPA表达的影响,为子宫颈癌HPA分子靶向治疗提供理论依据。方法优化设计并合成了两个系列共13种1,3-O,N螺杂环类化合物,产品编号为10～22号,其中21号为HPA抑制剂——DMBO化合物,余12种为新合成的化合物。其中,1个系列含甲氧苯基,产品编号为10～14号;另1个系列不含甲氧苯基,产品编号为15～22号。（1）采用乙酰肝素降解检测试剂盒检测新合成的化合物（选择与DMBO结构类似度高的6个化合物,即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性的作用,以50%抑制浓度（IC50）表示作用的强弱;（2）四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测新合成的化合物（7个化合物,即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用后HeLa细胞生长的抑制作用,选择抑制作用最大的化合物（即16号化合物）用于以下实验;（3）细胞划痕实验观察16号化合物作用后HeLa细胞迁移能力的变化;（4）流式细胞仪检测16号化合物作用后HeLa细胞的细胞周期比例和细胞凋亡率的变化;（5）实时定量逆转录（RT）-PCR技术、蛋白印迹法和免疫组化法检测16号化合物作用后HeLa细胞中HPA mRNA和蛋白表达的变化。结果（1）6个新合成的化合物（即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性均有不同程度的抑制作用,除22号化合物抑制作用不明显无法测出IC50值外,14、15、16、20、21号化合物的IC50值分别为4.47、21.81、8.36、14.13、47.19μmol/L。（2）MTT比色法检测显示,不同浓度（分别为1、5、15、30、60、120、180、240μmol/L）的7个新合成的化合物（即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用48 h对HeLa细胞的生长均有抑制作用,并呈明显的浓度依赖性（P<0.01）,其中16号化合物的抑制效果最显著（IC50值为48.16μmol/L）;进一步检测显示,16号化合物作用不同时间（分别为24、48、72、96 h）后对HeLa细胞生长的抑制作用呈明显的时间依赖性（P<0.01）。（3）细胞划痕实验观察显示,作用24 h后,实验组（加入50μmol/L的16号化合物,下同）HeLa细胞迁移能力明显受到抑制,其划痕的宽度明显大于对照组（不加16号化合物,下同）。（4）流式细胞仪检测显示,作用48 h后,实验组HeLa细胞G0/G1期、G2/M期比例分别为（75.85±1.77）%、（11.65±0.64）%,均明显高于对照组[分别为（49.10±3.11）%、（0.17±0.24）%;P<0.01];S期细胞比例为（12.50±1.13）%,明显低于对照组的（50.70±2.83）%（P=0.003）。实验组HeLa细胞的凋亡率为（11.9±1.2）%,明显高于对照组的（6.6±1.8）%（P=0.013）。（5）实时定量RT-PCR技术和蛋白印迹法检测显示,作用48 h后,实验组HeLa细胞中HPA mRNA和蛋白的表达水平分别为1.23±0.46和0.46±0.31,明显低于对照组的3.43±0.45和1.30±0.58（P<0.05）;免疫组化法检测显示,实验组累积吸光度（IA）值为0.39±0.04,对照组为0.50±0.09,两组比较,差异有统计学意义（P=0.026）。结论新型1,3-O,N螺杂环类HPA抑制剂可能通过凋亡途径显著抑制子宫颈癌HeLa细胞的生长;该类抑制剂可明显抑制HeLa细胞的HPA活性,并下调其HPA mRNA和蛋白的表达。     

子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK、VEGF及IGF-2表达及其临床意义

目的 分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-2(IGF-2)在子宫肌瘤组织内的表达及临床意义。方法 选取76例子宫肌瘤患者,收集其子宫肌瘤组织及正常子宫组织,采用免疫组织化学法测定MMP-2、MLCK、VEGF及IGF-2表达,统计对比两者的阳性率。结果 子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK、VEGF及IGF-2阳性表达率分别为69.74%(53/76)、60.53%(46/76)、81.58%(62/76)、92.11%(70/76),高于正常子宫组织的15.79%(12/76)、10.53%(8/76)、17.11%(13/76)、30.26%(23/76),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MMP-2、MLCK、VEGF及IGF-2在子宫肌瘤组织中呈异常的高表达,与疾病的发生与发展存在紧密联系。     

白藜芦醇对子宫内膜癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响

【目的】 探讨白藜芦醇对子宫内膜癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及机制。【方法】 采用子宫内膜癌Ishikawa细胞接种于裸鼠右腋部皮下建立子宫内膜癌荷瘤裸鼠模型,将30只建模成功的裸鼠分为模型组、顺铂组和白藜芦醇低、中、高剂量组,每组6 只。顺铂组给予顺铂 2 mg/kg 腹腔注射,白藜芦醇低、中、高剂量组分别给予 2.5、5、10 mg·kg-1的白藜芦醇腹腔注射,每天 1 次,连续给药21 d。测定荷瘤裸鼠肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线;计算抑瘤率及胸腺指数和脾脏指数;酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）含量;流式细胞术检测外周血中CD4+、CD8+ T淋巴细胞水平;测定脾脏中NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞增殖转化能力及腹腔巨噬细胞吞噬功能;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测脾脏中Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子 88（MyD88）、核因子κB（NF-κB）p65蛋白表达水平。【结果】（1）白藜芦醇及顺铂对荷瘤裸鼠的干预显著抑制了移植瘤的生长,并且随着白藜芦醇剂量的增加,抑瘤率明显提高。（2）与模型组比较,顺铂组的胸腺指数和脾脏指数均显著降低（P＜0.05）,但白藜芦醇低、中、高剂量组的胸腺指数和脾脏指数均显著增加（P＜0.05）。（3）白藜芦醇低、中、高剂量组及顺铂组血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2含量均显著高于模型组（P＜0.05或P＜0.01）。（4）与模型组比较,白藜芦醇低、中、高剂量组外周血中CD4+ T细胞水平显著增加（P＜0.05）、CD8+ T细胞水平显著降低（P＜0.05）、CD4+/CD8+比值显著增加（P＜0.05）,T淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能及NK细胞杀伤活性均显著增加（P＜0.05）,脾脏中TLR4、MyD88及NF-κB p65蛋白的表达水平均显著增加（P＜0.05）;但顺铂组与模型组比较,淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能及NK细胞杀伤活性均显著降低（P＜0.05）,CD4+、CD8+ T细胞水平及CD4+/CD8+比值无显著变化（P＞0.05）,TLR4、MyD88及NF-κB p65蛋白的表达无显著变化（P＞0.05）。【结论】 白藜芦醇能够抑制子宫内膜癌荷瘤祼鼠肿瘤的生长,其作用机制可能与激活脾脏TLR4/MyD88信号通路,调节机体的免疫功能有关。