三七总皂苷对缺血再灌注大鼠脑组织CaMKⅡβ mRNA及蛋白的影响

目的 研究三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马及皮层钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱβ mRNA及蛋白表达的影响.方法 实验大鼠随机分为实验对照组、伪手术组、模型组、PNS治疗组,采用尼龙线插线法建立局灶性脑缺血再灌注模型.治疗组于术后2、14、26、38 h分别于腹腔给予50 mg/kg PNS,各组大鼠于48 h处死,急性分离海马及皮层组织,分别采用RT-PCR及Western印迹技术检测CaMK Ⅱβ mRNA及蛋白表达.结果 海马组织与皮层的CaMK Ⅱβ mRNA表达变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ mRNA表达没有显著性差异(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMK Ⅱβ mRNA表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).采用Western印迹从蛋白质水平检测CaMK Ⅱβ表达,结果显示:海马组织与皮层的变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ蛋白表达没有明显变化(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA蛋白表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMKⅡβ 蛋白表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).蛋白变化趋势与基因表达结果一致.结论 PNS可能通过降低缺血再灌注大鼠海马及皮层CaMKⅡβ mRNA及蛋白表达对脑神经元损伤所起的保护作用,从而发挥其对脑缺血的治疗作用.     

基底拉伸应变对小鼠成骨细胞Runx2表达的影响

目的研究基底拉伸应变对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞Runx2表达的影响。方法实验随机分为0με、1000με、1500με、2000με、2500με、5000με六组,采用卫生装备研究所自行研制的细胞基底应变加载装置对细胞进行加载,Western blot检测不同应变对成骨细胞Runx2蛋白表达的影响。此外采用Real-time PCR检测0με、2500με、5000με三种强度应变对成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响。结果 Western blot结果显示:1500με、2000με、2500με组与0με组相比Runx2蛋白表达显著增强(P<0.01);5000με组与0με组相比Runx2蛋白表达显著降低(P<0.01);Real-timePCR结果显示:2500με组与0με组相比Runx2 mRNA表达显著降低(P<0.01);5000με组与0με组相比Runx2 mRNA表达显著增加(P<0.01)。结论①生理强度的拉伸应变可显著增加MC3T3-E1细胞Runx2蛋白的表达,并且呈剂量依赖性,超生理强度5000με显著降低Runx2蛋白表达。②同样强度的拉伸应变刺激下,Runx2基因表达与蛋白表达并不一致。     

载荷作用下成骨细胞的力转导和信号传递机制

成骨细胞是骨组织中的重要细胞,在骨的形成、发育、改建、修复过程中发挥重要作用。力转导是将力学刺激转化为细胞的生化响应的过程,是引起后续一系列生理反应的基础。信号通路则是一个复杂的网络状信号传递系统,其将信号传入核内引起基因表达的变化。本文将从力转导和信号通路两方面对成骨细胞响应载荷的机制进行综述。     

基底拉伸应变对小鼠三种骨组织细胞BMP-2 mRNA表达的影响

目的研究基底拉伸应变对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1、破骨细胞系RAW264.7及骨细胞MLO-Y4三种细胞BMP-2mRNA表达的影响。方法三种细胞随机分为0με、1000με、1500με、2000με、2500με和5000με组,最佳拉伸时间和周期为1次/d,每次1h,连续3d,频率为0.5Hz。采用卫生装备研究所自行设计研制的四点弯曲装置对小鼠三种细胞进行拉伸加载。采用RT-PCR技术分别研究不同应变对小鼠三种细胞BMP-2mRNA表达。结果 MC3T3-E1细胞RT-PCR结果显示:1500με、2000με组和2500με组与0με组相比BMP-2mRNA表达显著增强(P0.01);5000με组与0με组相比BMP-2mRNA表达显著降低(P0.01);RAW264.7细胞RT-PCR结果显示:1500με、2000με组和2500με组与0με组相比BMP-2mRNA表达显著降低(P0.01);5000με组与0με组相比BMP-2mRNA表达显著降低(P0.01);MLO-Y4细胞BMP2基因表达结果与MC3T3-E1一致。结论①BMP-2在成骨细胞系MC3T3-E1、破骨细胞系RAW-264.7及骨细胞系MLO-Y4三种细胞中均有表达;②1500με、2000με、2500με三种生理剂量的拉伸应变可以显著增加MC3T3-E1、MLO-Y4细胞BMP-2的表达,并呈剂量依赖性,超生理剂量5000με可以显著降低MC3T3-E1、MLO-Y4细胞BMP-2的表达;③相同的力学拉伸作用条件下,BMP-2在RAW-264.7细胞中表达与MC3T3-E1、MLO-Y4细胞的表达趋势相反。     

药用植物泰山四叶参DNA提取方法的研究

目的 探讨不同DNA 提取方法对泰山四叶参DNA 质量的影响.方法 对提取的DNA 进行紫外光谱分析、总DNA 电泳及RAPD 分析.结果 不同方法提取的DNA 质量及产率存在显著差异.结论 结果表明改良CTAB 法和改良SDS 法较好.