DNA损伤诱导胃癌细胞端粒酶活性和TRF2表达增高

目的:检测在化疗药引起胃癌细胞DNA损伤过程中端粒酶、TRF1和TRF2的表达.方法:用不同浓度足叶乙甙处理胃癌细胞SGC7901和MKN28,分别在3,6,12,24和36h进行检测.采用实时定量TRAP分析检测端粒酶活性;用实时RT-PCR检测hTERTmRNA表达;用Westernblot和实时RT-PCR检测TRF1和TRF2表达.结果:两种细胞端粒酶活性及TRF2mRNA表达均在药物处理的早期明显增高(P<0.05),且显示明显的药物浓度依赖性(P<0.05);TRF1表达稍增高,但无统计学意义(P>0.05).hTERTmRNA表达无明显改变(P>0.05).TRF2表达在蛋白和mRNA水平均增高(P<0.05).结论:端粒酶和TRF2参与化疗药引起的胃癌细胞DNA损伤反应.     

肝硬化腹水患者内毒素、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素水平的检测及临床意义

腹水是肝硬化门脉高压患者最常见症状之一,一旦发生提示肝硬化由代偿期进入失代偿期。内毒素、细胞因子在肝硬化患者病情发展及转归中起重要作用。本研究对肝炎肝硬化腹水患者血浆、腹水内毒素及具有代表性的前炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平变化、相互关系及其临床意义进行了初步探讨,现报告如下。     

TRF2 siRNA抑制多药耐药胃癌细胞Rapl表达

目的应用RNA干扰技术抑制多药耐药衍生胃癌细胞系TRF2表达,观察其对Rapl表达的影响。方法根据pSilencer3．1-H1载体要求构建TRF2siRNA真核表达载体,分别转染SGC7901／ADR和SGC7901／VCR细胞,免疫荧光技术和Westernblot方法检测Rapl表达。结果成功构建TRF2 siRNA真核表达载体能显著抑制耐药细胞TRF2表达,siRNA转染细胞中Rapl表达明显降低。结论TRF2调控Rapl表达。     

胃癌组织中CagA+幽门螺杆菌感染和环氧合酶-2检测

目的探讨胃癌组织中CagA+Hpylori感染对环加氧酶2(cox2)mRNA表达的影响.方法采用原位杂交法检测40例慢性浅表性胃炎、31例慢性萎缩性胃炎伴肠化、34例不典型增生、55例胃癌组织中cox-2 mRNA的表达情况;快速尿素酶试验和warthin-starry银染色结合C14-呼气试验检测Hpylori感染情况;斑点金免疫渗滤法检测患者血清抗H pylori CagA IgG抗体.结果慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生和胃癌组织中cox-2 mRNA的表达率呈递增趋势,胃癌与慢性浅表性胃炎组织中的cox-2 mRNA表达率差异有统计学意义(P＜0.05);cox-2 mRNA表达与胃癌的分化程度及淋巴结转移情况有关(P＜0.05);Hpylori阳性慢性浅表性胃炎和慢性萎缩性胃炎伴肠化组织中cox-2 mRNA阳性表达率高于Hpylori阴性组,差异有统计学意义(P＜0.05);在不典型增生和胃癌组织中Hpylori阳性组与Hpylori阴性组cox-2 mRNA的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05);Hpylori阳性慢性浅表性胃组织炎中抗Hpylori CagA IgG抗体阳性率低于Hpylori阳性胃癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05);cox-2 mRNA表达与H pylori CagA密切相关(P＜0.05).结论Cox-2参与胃癌的发生发展,同时也增加其转移的潜能;H pylori通过诱导cox-2表达上调参与胃癌病变;CagA是H pylori的重要致病因素,与cox-2 mRNA表达上调及胃癌的发生密切相关.     

Cronkhite-Canada综合征临床分析

Cronkhite-Canada综合征(CCS)是1955年首次描述的罕见综合征,国内又称之为胃肠道息肉-色素沉着-脱发-指(趾)甲营养不良综合征。该疾病的特征为弥漫性胃肠道息肉、指甲营养不良、脱发、皮肤色素沉着、腹泻、体质量减轻和腹痛。该病的报道以个案居多,诊断主要依靠病史、体格检查、内镜检查以及活检,目前尚无公认的治疗指南。CCS的病因尚不明确,目前无大量证据表明该病有家族性倾向,也尚未排除后代中出现相关症状或患病的可能性。现就郑州大学第一附属医院确诊的2例家族性CCS患者并结合国内外相关文献进行分析探讨。     

不同菌群移植方案治疗腹泻模型的疗效对比分析

目的通过研究不同成分菌群移植后腹泻型SD大鼠模型的症状改善率(体重增长量、腹泻抑制率)、炎症指标及腹泻缓解天数,进一步探讨标准化菌群移植治疗对腹泻型模型的有效性与安全性。方法选取7周左右大小的SD雄性大鼠作为研究对象,随机分为空白对照组、模型对照组、成分菌群组、标准化菌群组,每组各10只;除空白对照组外,其余3组使用番泻叶复制大鼠腹泻模型。标准化粪菌供体采用空白对照组采集的新鲜粪便;成分菌群由4种常见的益生菌混合而成;模型对照组由生理盐水代替。腹泻使用灌胃方法每2天1次,一共3次;治疗前后一周内需检测并记录大鼠的体重、腹泻抑制率、炎症指标和腹泻缓解天数、肠道菌群丰度等,从以上几个方面对模型进行评价。结果菌群移植后,成分菌群组和标准化菌群组大鼠腹泻抑制率均明显升高,其中标准化菌群组腹泻抑制率升高最明显达67.30%。成分菌群组和标准化菌群组的炎症指标略低于模型对照组,差异具有显著性(Sidak’s multiple comparisons test:t=4.15, P0.001,t=5.647, P0.001)。成分菌群组和标准化菌群组的腹泻缓解天数均低于模型对照组,差异具有显著性(Dunnett’s multiple comparisons test:q=6.175, q=11.7, P0.001)。与空白对照组大鼠体重增长量相比,其余各组体重量增长均降低,其中模型对照组最低为1.82%。各组肠道菌群分析结果微生物种类及含量无明显差异,其中标准化菌群组与正常大鼠肠道菌群类似。结论成分菌群和标准化菌群对大鼠腹泻模型均具有良好的治疗效果,其中成分菌群的治疗效果次于标准化菌群,为实际临床工作提出了可能的理论指导。在有条件使用标准化菌群移植的时候,排除禁忌后优选选择标准化菌群移植。本实验属于小样本动物模型实验,后期需要大样本动物及临床实验来验证,为临床试验提供了一个很好的指导思路,具有一定的参考价值。     

端粒重复序列结合因子2小干扰核糖核酸逆转胃癌细胞多药耐药性的研究

阿霉素(Adriamycin,ADR)和依托泊苷是临床常用的肿瘤化学治疗药物,主要作用机制为抑制DNA拓扑异构酶,导致DNA双链断裂(double-strand DNA breaks, DSB) [1].肿瘤细胞发生耐药与多种机制有关,其中对DNA损伤修复的影响是其中重要的一环[2].端粒重复序列结合因子2(telomeric repeat binding factor 2, TRF2)能够通过维持端粒末端的T环结构,防止端粒被DNA损伤修复机制检测为DSB,维持端粒的正常结构和功能[3-4].     

腺病毒细菌重组系统表达Crg-2蛋白的实验研究

目的利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白。方法首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Westernblot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性。结果穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Westernblot检测有一接近Mr10000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用。结论采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg-2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2。     

肝硬化自发性腹水感染患者肠通透性检测的临床意义

肝硬化自发性腹水感染(SAI)是新近提出的取代自发性细菌性腹膜炎的概念及理论，SAI为肝硬化腹水患者常见且严重并发症。现已明确肠黏膜屏障功能受损、肠细菌、内毒素易位是肝硬化门静脉高压患者SAI发生及发展的主要致病机制，因此建立有效监测肝硬化腹水患者肠黏膜屏障功能状态的方法对于防治SAI具有重要意义。依据腹     

幽门螺杆菌菌蜕载体阿霉素对胃癌细胞的杀伤作用

目的 制备幽门螺杆菌(Hp)菌蜕(BG),并装载阿霉素,观察其对胃癌细胞的杀伤作用。方法通过细菌结合作用将裂解质粒导入Hp,42℃诱导细菌裂解制备Hp BG,经悬浮、离心装载阿霉素,分光光度法检测阿霉素装载量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Hp BG-阿霉素对胃癌细胞SGC7901的杀伤作用。结果 成功制备Hp BG并装载阿霉素,阿霉素的装载量为70.4μg/mg。共聚焦显微镜可见HpBG能被胃癌细胞吸附和内化,分布于SGC7901细胞表面或胞质,所携带的阿霉素传递入胃癌细胞,主要积聚于细胞核。MTT法检测显示SGC7901细胞对HpBG-阿霉素的IC50值为0.32±0.15,明显低于游离阿霉素（0.44±0.15,P＜0.05）。结论HpBG-阿霉素能有效抑制胃癌细胞生长,HpBG有望成为理想的抗胃癌药物载体。