枸杞咀嚼片免疫调节及抗氧化活性分析

目的：探究枸杞咀嚼片对正常小鼠固有免疫和适应性免疫调节作用及其体内外的抗氧化活性。方法：采用碳廓清实验、免疫器官指数实验、血清溶血素实验、刀豆蛋白A(Con A)诱导脾淋巴细胞增殖实验及小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)活性实验,观察枸杞咀嚼片低、中、高剂量组(0.25、0.5、1.5 g·kg^-1)对正常小鼠免疫功能的影响。通过检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平判断枸杞咀嚼片对体内抗氧化能力的影响。以2,2’-联氨-双(3-乙基苯井噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)自由基、2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)自由基和羟基自由基清除实验,检测枸杞咀嚼片的体外抗氧化活性。结果：与空白组比较,枸杞咀嚼片低、中、高剂量组均可明显提高小鼠NK细胞活性、脾淋巴细胞增殖能力和小鼠血清溶血素抗体水平(P<0.05);高剂量组可明显增加小鼠胸腺指数、脾脏指数和巨噬细胞吞噬功能(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,枸杞咀嚼片中剂量组小鼠血清中GSH-Px活力明显升高(P<0.05),高剂量组...     

基于磷酸二酯酶抑制活性的清金化痰汤抗炎活性评价方法建立

目的 基于磷酸二酯酶（PDE）抑制活性,建立清金化痰汤抗炎活性测定方法,补充与完善该经典名方的质量控制体系。方法 采用高效液相色谱法（HPLC）建立PDE活性测定方法,考察清金化痰汤抑制PDE活性的量效关系,流动相甲醇-0.5%乙酸水溶液（5∶95）,检测波长254 nm。通过测定多批清金化痰汤水提物冻干粉对PDE的抑制率,以中和酶的活性国际单位U标示其生物活性。结果 选择4 U·mL^-1 PDE溶液,在反应底物环磷酸腺苷（cAMP）浓度为50 μmol·L^-1、反应时间为60 min时,酶促反应稳定。在此反应体系下,当清金化痰汤水提物冻干粉终质量浓度为0.11~3.0 g·L^-1时,其对PDE的抑制作用呈现浓度依赖性。确定清金化痰汤水提物冻干粉待检质量浓度1 g·L^-1,在该质量浓度下对PDE呈显著且稳定抑制作用,抑制率>45%,即1 mg的清金化痰汤水提物冻干粉至少可中和1.8 U PDE的活性。结论 建立了基于PDE抑制活性的清金化痰汤生物活性评价方法,以PDE活性国际单位U表征了清金化痰汤的抗炎活性,可为中药复方生物活性测定研究提供新方法。     

基于巨噬细胞吞噬及分泌功能的清金化痰汤生物限值测定

目的 建立基于小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬及分泌功能的清金化痰汤水提物冻干粉生物限值测定方法，从生物活性层面对清金化痰汤进行质量控制。方法 建立巨噬细胞RAW264.7吞噬模型和炎症模型，以清金化痰汤水提物冻干粉对巨噬细胞RAW264.7吞噬指数和白细胞介素-6（IL-6）分泌量的抑制率为指标，考察清金化痰汤水提物冻干粉的生物活性，并寻找生物限值。结果 巨噬细胞优选接种密度为3×10⁵个/mL，药物作用时间24 h，脂多糖（LPS）质量浓度1 mg·L^-1；当清金化痰汤水提物冻干粉质量浓度为500 mg·L^-1时，对RAW264.7巨噬细胞既无毒性也无明显促增殖作用，在此浓度下，对RAW264.7巨噬细胞吞噬中性红有明显促进作用，吞噬指数均>113%，且对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-6呈现出显著且稳定的抑制作用，抑制率>45%。结论 结合清金化痰汤抗炎及免疫调节的药理活性，建立了基于RAW264.7巨噬细胞吞噬及分泌功能的生物限值评价方法，在设定的实验条件下，确定500 mg·L^-1为限值浓度，在该限值浓度下，清金化痰汤水提物对巨噬细胞的吞噬指数有明显的促进作用或对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6的分泌量有明显抑制作用，均可判断为质量合格。