木鳖子对羟基桂皮醛对小鼠黑素移植瘤生长的抑制作用及机制研究

目的探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxycinnamaldehyde,PHD)对黑素瘤B16细胞体内生长的抑制作用。方法应用MTS法检测PHD对B16细胞增殖的影响,倒置相差显微镜下观察形态变化。构建黑素瘤B16细胞小鼠皮下移植瘤模型,分为2组:治疗组小鼠ip 2 mg/kg PHD,模型组注射相同体积的生理盐水。观察2组小鼠成瘤情况,并测量肿瘤体积和质量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中酪氨酸酶(Tyr)、S-100B、MMP-9、p-P38和p-ERK蛋白的表达变化;苏木精-伊红染色法(HE)分析小鼠肝和肺组织的形态学变化。结果 PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的生长抑制作用(P0.01)。20μmol/L PHD处理B16细胞48 h后,细胞数量减少,呈典型分化形态。PHD治疗组的肿瘤体积和质量均明显低于模型组(P0.01)。与模型组相比,治疗组小鼠肿瘤组织中Tyr和p-P38蛋白的表达水平升高,MMP-9、S-100B和p-ERK蛋白表达水平则明显降低。治疗组小鼠肝和肺无明显组织形态学改变,模型组小鼠肺部有肿瘤转移。结论 PHD对小鼠体内黑素移植瘤的生长具有显著抑制作用。     

木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤B16细胞的分化及其机制

探讨从中药木鳖子中提取的单体化合物对羟基桂皮醛（p-hydroxylcinnamaldehyde,PHD）对小鼠黑素瘤B16细胞分化的影响及其可能的作用机制。方法: 以10、20、40 μmol/L PHD作用B16细胞,设空白对照及福司克林（Forskelin）阳性对照组。磺酰罗丹明（suphrhodamineB,SRB）法检测PHD对B16细胞生长的抑制率,平板克隆集落形成实验检测细胞的克隆形成能力,Giemsa 染色观察细胞形态,比色法检测细胞中黑色素含量和酪氨酸酶（tyrosinase,Tyr）活性,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力,Western blotting检测Tyr、酪氨酸酶相关蛋白1（tyrosinase protein,Trp1）及MAPK信号转导通路中p-P38、p-JNK和p-ERK1/2的表达。结果：PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的增殖抑制作用,10、20、40 μmol/L PHD作用B16细胞48 h后,其增殖抑制率与对照组相比明显增加[（12.78±0.87）%、（37.70±2.28）%、（42.17±4.18）% vs 0,P<0.05],20、40 μmol/L PHD组增殖抑制率与Forskelin组相比明显增加[（37.70±2.28）%、（42.17±4.18）% vs（22.00±1.13）%,P<005]。40 μmol/L PHD处理B16细胞24、48、72 h后,B16细胞呈典型分化形态,黑色素含量及Tyr活性与对照组相比均明显增加[（0097±002）、（0.13±0.04）、（0.15±0.05）vs（0.085±0.003）;（1.11±0.31）、（1.43±0.05）、（1.67±0.49）vs (0.64±010）,P<005];细胞集落形成能力和迁移能力都明显降低（均P<0.05）。与空白对照组相比,PHD处理组细胞Tyr和Trp1的表达明显增加（P<0.05）,MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的表达水平也明显增加（P<0.05）,而p-ERK活性差异则无统计学意义（P>0.05）。结论：PHD通过上调MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的活性而对小鼠黑素瘤B16细胞产生明显的增殖抑制,并在形态和功能上诱导黑素瘤细胞的分化。     

香加皮杠柳苷通过溶酶体途径诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的 探讨香加皮杠柳苷（periplocin extracted from cortex periplocae, CPP）是否通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。方法 200、100、50 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24和48 h后,MTS 法检测细胞的增殖情况,用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测不同浓度香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后Caspase-3和Caspase-9的表达情况,吖啶橙染色检测溶酶体释放情况,免疫荧光法检测组织蛋白酶B（Cathepsin B）的表达变化情况。结果 与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24、48 h后,均具有增殖抑制作用,24 h增殖率分别为 [(66.43±1.67)%、(55.39±3.63)%、(37.06±0.57)% vs. (100.14±8.49)%,P均<0.05],48 h增殖率分别为[(38.16±3.26)%、(32.00±1.83)%、(24.75±1.57)% vs. (100.33±8.98)%,P均<0.05]。与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后,细胞凋亡率显著增加,凋亡率为[(28.56±6.96)%、(33.70±4.60)%、(60.42±4.48)% vs. (2.23±1.03)%,P均<0.05],Caspase-3的活性裂解片段和Caspase-9表达量升高,溶酶体膜的完整性被破坏,Cathepsin B由溶酶体释放到细胞质中。结论 香加皮杠柳苷可通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。