人脐血MSCs的分离培养及向神经的诱导分化

目的探讨人脐血中分离所得到间充质干细胞（MSCs）向神经组织细胞诱导分化的实验条件。方法淋巴细胞分离液分离正常人脐血单个核细胞,利用差速消化法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型。取2至4代的MSCs加入含有维甲酸（RA）与神经生长因子（NGF）的诱导分化培养基将其定向诱导,免疫细胞化学染色检测诱导后的MSCs神经元和神经胶质细胞标志的表达。结果脐血MSCs每传一代,细胞数量增加约2～3倍。流式细胞仪检测,脐血MSCs不表达CD34,表达CD25、CD29、CD105、CD106。诱导后的细胞不仅形态类似神经元和神经胶质细胞,而且表达神经丝蛋白200（NF）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）。结论从人脐血中可以分离得到与骨髓相似的MSCs,并且能够在体外分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞。     

外周α1受体作用参与应激对颈动脉窦反射的抑制

目的探讨外周α1受体是否影响应激对颈动脉窦反射(carotid sinus reflex,CSR)的重调定.方法应激1周的SD大鼠,麻醉后孤离双侧颈动脉窦区,将不同窦内压(intracarotid sinus pressure,ISP)与其对应的平均动脉压(me8n arterial pressure,MAP)值进行Logistic五参数曲线方程拟合,求得ISP-MAP关系曲线及其特征参数,观察外周静脉注射选择性α1受体拮抗剂酚苄明(phenoxybenzamine,PBZ)对CSR的影响.结果静脉注射PBZ(3 μ,moL/L,0.15 μL/ g)导致应激大鼠ISP(MAP关系曲线的后半程显著下移(P＜0.05),反射参数中阈压、饱和压和最大增益时的窦内压值分别从(128.37±10.05)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、(205.15±12.18)和(166.72±11.35)mmHg减少至(116.41±8.51),(188.15±11.77)和(152.28±9.30)mm Hg(F=6.60、8.05和7.75,P＜0.05);静脉注射相同剂量的PBZ对非应激大鼠的CSR无明显影响(P＞0.05);静脉注射PBZ不能使应激的CSR水平恢复到非应激给药后水平.结论外周α1受体参与应激对CSR的抑制性重调定;除此之外,应激作用中尚有其他因素的参与.     

基于巢式PCR方法联合Sanger测序技术对大黄庶虫丸中水蛭成分真伪的鉴定

目的 基于DNA条形码技术建立一种可以实现对大黄庶虫丸中水蛭成分真伪品鉴定的方法。方法 首先以COⅠ通用引物对大黄庶虫丸中成药DNA进行一轮聚合酶链式反应(PCR)扩增,随后采用自行设计和筛选出的水蛭通用引物对一轮PCR反应液进行二轮PCR扩增,联合Sanger测序技术,对二轮PCR扩增产物测序,最后对测序结果峰图采用seqman软件进行序列拼接,将拼接后的DNA序列在NCBI数据库中用BLAST在线比对软件进行比对判定,进而鉴定水蛭成分真伪。结果 本实验建立的巢氏PCR方法联合Sanger测序技术通过了对9份经COⅠ通用引物鉴定的水蛭干药材的验证,结果验证两方法鉴定结果一致。同时采用本研究建立的巢氏PCR方法联合Sanger测序技术对收集的14批大黄庶虫丸进行鉴定,共有5批鉴定出含有伪品水蛭成分。结论 本实验建立的的巢氏PCR方法联合Sanger测序技术能够实现对大黄庶虫丸中水蛭成分真伪品的鉴定,对中成药的质量控制具有一定的意义。     

SOD注射液的细胞内毒素测定方法及其半定量分析

采用鲎试剂法测定超氧化物歧化酶（SOD）注射液内毒素含量时发现,阳性对照组出现假队性结果,一般稀释以漩涡稀释的工作标准品的效价低,认为,细菌内毒辣纱工作标准品的稀释方法不当时出现假阴性结果的原因之一,在进行内毒素工作标准品稀释过程中,必须经混旋器进行充分漩涡混合,利用本本测方法对细菌内毒素含量进行半宇分析结果表明,SOD注射液细菌内素含量为6．0－7．5EU／ml,符合标准。     

孤束核组胺能受体参与应激大鼠颈动脉窦压力感受性反射的重调定

目的 探讨孤束核(NTS)组胺(HA)能受体是否影响应激对颈动脉窦压力感受性反射(CSR)的重调定。方法 应激一周的大鼠，麻醉后孤离双侧颈动脉窦区，将不同窦内压(ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic五参数曲线拟合，求得ISP-MAP关系曲线及特征参数，观察NTS注射不同HA受体拮抗剂对CSR的影响。结果 应激导致ISP-MAP关系曲线显全面上移，反射参数中阈压、饱和压、调定点和最大增益时ISP值增大，MAP反射变动范围及最大增益减小；NTS内注射H1或H2受体拮抗剂(氯苯吡胺，CHL，0．5／μg或西咪替丁，CIM，1．5μg)20min内均可明显减弱应激对CSR的上述改变，CIM减弱作用不如CHL；NTS内注射CHL或CIM后，均不能使应激的CSR水平完全恢复到相应的非应激对照水平。结论 应激引起CSR重调定，反射敏感性下降；部分机制可能是激活中枢HA能系统，NTS的H1和H2尤其H1受体在应激引起CSR重调定的机制中发挥重要作用；下丘脑-NTS的HA能通路可能是应激所致CSR重调定的下行通路之一。     

蓝斑H1受体作用参与脑室注射组胺对颈动脉窦反射的重调定

目的 研究蓝斑（LC）H1受体是否参与调制中枢外源性组胺（HA）对颈动脉窦反射（CBR）的重调定。方法 孤离麻醉SD大鼠的双侧颈动脉窦区，将不同窦内压（ISP）与其对应的平均动脉压（MAP）值进行Logistic五参数曲线拟合，求得ISP-MAP关系曲线及其特征参数，观察脑室注射（icv）HA以及预先在LC微量注射选择性H。受体拈抗剂氯苯吡胺（CHL）对CBR的影响。结果 icv HA（100ng）导致ISP-MAP关系曲线明显上移（P〈0．05），反射参数中阈压、饱和压和最大增益时的窦内压值增大（P〈0．05），MAP反射变动范围及反射最大增益减小（P〈0．05）；预先向LC内微量注射CHL（0．5μg／μl），可明显减弱HA的上述效应；单独向LC内注射相同剂量的CHL对CBR无明显影响（P〉0．05）。结论 脑室给HA使CBR产生快速重调定，反射敏感性下降；LC的H1受体作用参与icvHA对CBR的抑制性重调定，下丘脑-LC的HA能通路可能是中枢HA调节CBR的下行通路之一。     

外周α1受体作用参与应激对颈动脉窦反射的抑制

目的：探讨外周α1受体是否影响应激对颈动脉窦反射(carotid sinus reflex,CSR)的重调定。方法：应激1周的SD大鼠，麻醉后孤离双侧颈动脉窦区，将不同窦内压(intracarotid sinus pressure，ISP)与其对应的平均动脉压(meson arterial pressure，MAP)值进行Logistic五参数曲线方程拟合，求得ISP-MAP关系曲线及其特征参数，观察外周静脉注射选择性α受体拮抗剂酚苄明(phenoxybewamine，PBZ)对CSR的影响。结果：静脉注射PBZ(3μmoL／L，0．15μL／g)导致应激大鼠ISP(MAP关系曲线的后半程显著下移(P&;lt;0．05)，反射参数中阈压、饱和压和最大增益时的窦内压值分别从(128．37&;#177;10．05)mmHg(1mmHg=0．133kPa)、(205．15&;#177;12．18)和(166．72&;#177;11．35)mmHg减少至(116．41&;#177;8．51)．(188．15&;#177;11．77)和(152．28&;#177;9．30)mmHg(F=6．60、8．05和7．75．P&;lt;0．05)；静脉注射相同剂量的PBZ对非应激大鼠的CSR无明显影响(P&;gt;0．05)；静脉注射PBZ不能使应激的CSR水平恢复到非应激给药后水平。结论：外周α1受体参与应激对CSR的抑制性重调定；除此之外，应激作用中尚有其他因素的参与。     

Syndecan-1在神经干细胞的表达及其与AC133的关系

目的 研究syndecan-1（CD138）在人的胚胎神经干细胞上的表达及其与AC133的关系。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析。通过CD138、AC133直标单克隆抗体（mAb）观察神经干细胞细胞膜上CD138和AC133荧光标记阳性率;同时通过双重免疫荧光标记法,观察神经干细胞细胞膜上共表达CD138和AC133的百分比。结果 神经干细胞上均表达CD138和AC133分子,同时,表达AC133分子的冲经干细胞约有50％左右表达CD138分子。结论 在神经干细胞的早期已有CD138分子的表达。其对神经干细胞的生长、分化等作用值得进一步研究。     

SOD注射液的细菌内毒素测定方法及其半定量分析

采用鲎试剂法测定超氧化物歧化酶(SOD)注射液内毒素含量时发现，阳性对照组出现假阴性结果，一般稀释比漩涡稀释的工作标准品的效价低，认为，细菌内毒素工作标准品的稀释方法不当是出现假阴性结果的原因之一，在进行内毒素工作标准品稀释过程中，必须经混旋器进行充分漩涡混合。利用本检测方法对细菌内毒素含量进行半定分析结果表明，SOD注射液细菌内毒素含量为6.0～7.5EU/ml，符合标准。     

鼠抗人多聚体蛋白聚糖单克隆抗体对骨髓瘤细胞株生长的抑制作用

目的研究多聚体蛋白聚糖(syndecan-1,CD138)单克隆抗体(mAb)4B3对天然表达syndecan-1的人多发性骨髓瘤(MM)细胞XC-1和XG-2的生物学效应。方法采用间接免疫荧光标记和流式细胞术分析,通过4B3mAb观察XC-1和XC-2细胞膜上syndecan-1荧光标记阳性率;按常规培养方式对XC-1、XG-2进行细胞培养和台盼蓝染色记数,观察不同浓度的4B3mAb对XC-1和XG-2细胞体外生长作用。结果4B3mAb能识别XG-1和XG-2细胞表达的syndecan-1分子,表达率与商品化的鼠抗人syndecan-1 mAb(BB4)相似;同时,4133mAb与XG-1和XG-2细胞膜上syndecan-1荧光标记阳性率基本一致,反应均呈强阳性;加入不同浓度的4B3mAb,XC-1细胞数量2d后开始下降,而XG-2细胞3d后数量出现减少。结论4B3mAb抗体对XC-1和XG-2均具有明显的生长抑制作用,但XG-2细胞的生长抑制作用早于XC-1,可为MM的生物治疗提供新途径。