缺氧微环境下仙连解毒方抑制结直肠癌细胞增殖的作用及机制

目的：观察缺氧微环境下仙连解毒方对含溴结构域蛋白4(Brd4)诱导的核转录因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响,探讨其抑制结直肠癌细胞HT-29增殖的作用机制。方法：于缺氧培养箱或常氧培养箱中培养人结直肠癌细胞HT-29,给予仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L-1）干预细胞48 h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;采用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检测仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L-1）对细胞线粒体膜电位的影响,采用流式细胞术检测结直肠癌细胞HT-29凋亡情况;细胞克隆形成实验及5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EDU）法检测结直肠癌细胞HT-29细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Brd4及其下游蛋白如c-核蛋白类基因（c-Myc）、六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1(HEXIM1)的表达水平,同时检测仙连解毒方对NF-κB信号通路相关蛋白的影响。结果：与空白组比较,仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L-1）组均能抑制结直肠癌细胞HT-29细胞活力（P<0.05,P&l...     

仙连解毒方维持肿瘤相关血管内皮细胞稳态抑制肿瘤血管新生的作用机制

目的：观察仙连解毒方对肿瘤相关内皮细胞(CRE)增殖、凋亡、迁移的影响,并探讨仙连解毒方调控血管生成素2(Ang2)维持肿瘤相关内皮细胞稳态抑制肿瘤新生血管生成的作用机制。方法：人结直肠癌细胞HCT-116条件培养基诱导人脐静脉内皮细胞系(HUVEC-c)为肿瘤相关内皮细胞。设置空白组、条件培养基组、仙连解毒方组(1、2、3 g·L^-1),分别作用于肿瘤相关内皮细胞48 h。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测CRE细胞增殖能力;倒置显微镜观察CRE细胞形态变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;细胞伤口愈合实验和Transwell迁移实验检测CRE细胞2D/3D迁移能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测仙连解毒方对CRE细胞波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Ang2等蛋白的表达。结果：MTT比色法结果显示,与空白组比较,条件培养基组细胞活力明显增强(P<0.05);与条件培养基组比较,仙连解毒方组细胞增殖率显著降低(P<0.01);细胞形态发生明显改变。流式细胞术结果显示,与条件...     

缺氧微环境下仙连解毒方通过调控HIF-1α影响结直肠癌细胞迁移的作用及机制研究

目的 通过体外实验研究缺氧微环境下仙连解毒方(Xian-Lian-Jie-Du-Formula,XLJDF)抑制结直肠癌细胞迁移的有效性及其潜在机制。方法 厌氧细胞培养箱(95%N2、5%CO2,O2浓度<1%)中培养人结直肠癌细胞HCT-116,MTT比色法检测XLJDF对细胞活力的影响;伤口愈合实验和细胞迁移实验(Transwell法)检测XLJDF对细胞迁移能力的作用;取对数生长期的细胞分组进行转染和慢病毒感染,RTPCR检测HCT-116细胞中HIF-1α mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HCT-116细胞中HIF-1α、EMT相关蛋白的表达情况及XLJDF对TGF-β/smad信号通路的调控作用。结果 缺氧条件下,XLJDF能抑制HCT-116细胞活性(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验示,XLJDF干预后,与空白对照组相比,细胞迁移速率显著降低(P<0.05或P<0.01),传入下室的细胞数目显著减少(P<0.05或P<0.01);与空载体组对比,XLJDF能降低...