表观遗传影响胚胎发育研究进展

表观遗传学是研究没有DNA 序列变化的、可遗传的基因表达改变,这种改变在胚胎发育和细胞增殖过程中能稳定传递,是胚胎发育的关键.     

5-氮脱氧胞苷及曲古抑菌素A影响供核细胞H19基因表达的时间依赖性及浓度依赖性

目的:探讨甲基转移酶抑制剂——5-氮脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-dC)和组蛋白去乙酰基酶抑制剂——曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)影响供核细胞H19基因表达的时间依赖性和浓度依赖性。方法:用不同浓度5-aza-dC及TSA按不同作用时间处理供核细胞(鼠尾尖成纤维样细胞),利用实时定量PCR法检测处理后H19基因的表达。结果:不同浓度的5-aza-dC处理组之间H19的表达无明显差异,但延长作用时间可使H19表达增强;TSA使H19的表达下降,但无时间依赖性。结论:长时间低浓度的5-aza-dC能增强供核细胞中H19基因的表达,而TSA则使H19的表达减弱,为体细胞克隆中表观遗传修饰抑制剂的选择及后续基因印迹研究提供了依据。     

CRISPR/Cas9介导下高效敲除SQSTM1/p62基因的Hela细胞模型的建立

目的 :探讨针对p62双sgRNA向导CRISPR/Cas9基因编辑效率。方法 :采用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除p62基因,通过细胞有限稀释法和嘌呤霉素筛选,免疫印迹法验证双sgRNA和单sgRNA向导的基因编辑成功率;流式细胞仪验证p62缺失对Hela细胞凋亡的影响。结果 :免疫印迹分析得出双sgRNA导向的p62敲除效率高于单sgRNA导向的敲除,靶序列测序比对分析确认p62编码基因发生大片段缺失突变。H_2O_2处理稳定敲除的Hela细胞系显示,p62基因敲除能明显抑制Hela细胞H_2O_2诱导的早期细胞凋亡。结论 :成功建立了p62敲除的Hela细胞系,双sgRNA向导的CRISPR/Cas9基因编辑体系可能是一种更有效的编辑工具。     

缺血修饰性清蛋白检测在早期心肌缺血患者中的应用价值

目的探索缺血修饰性清蛋白（IMA）在早期心肌缺血中的应用价值。方法采用清蛋白钴结合试验分别测定健康对照组和心肌缺血组的清蛋白和钴离子结合能力（ACB）,分别测定两组的血清清蛋白（ALB）值,分别计算两组的ACB/ALB比值,再进行分析。结果健康对照组和心肌缺血组的ACB均值为（25.0±5.13）、（62.25±7.84）U/ml;ALB均值分别为（44.36±3.07）、（40.67±6.37）g/L;其ACB/ALB均值分别为（1.79±0.10）、（1.53±0.15）;两组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。心肌缺血组存在较多的IMA,IMA结合钴离子的能力下降。结论 IMA是早期心肌缺血的一个良好辅助诊断指标。     

老年人肛门压力变化的观察

目的研究老年人肛门直肠动力的变化.方法20例老年人作为老年组进行肛门直肠测压并与22例中青年作对照.结果老年组肛管静息压为39.01士15.21 mmHg,显著低于中青年组的肛管静息压51.68士17.76 mmHg(P＜0.05),最大收缩压、最大松弛压、直肠肛门抑制反射和直肠静息压老年组分别为108.45士44.86 mmHg、69.70士26.42 mmHg,21.67士6.51ml和6.84士1.12 mmHg,两组之间无显著差异(P＞0.05).结论随增龄老年人肛门静息压较中青年降低,可能为老年人大便失禁多见的原因之一.     

Igf2r及Mest印迹基因在供核细胞中的表达及意义

目的：探讨细胞传代培养对胰岛素样生长因子Ⅱ受体（insulin-like growth factor Ⅱ receptor,Igf2r）和Mest基因表达的影响,以及它们在不同部位来源的成纤维样细胞（fibroblast-like cells）中的表达。方法：利用实时定量PCR法检测印迹基因Igf2r和Mest在来源于鼠耳和尾尖的成纤维样细胞中的表达。结果：在鼠尾成纤维样细胞的传代培养中,随着培养代数的增加,Igf2r的表达减弱,Mest的表达无明显变化;Igf2r在鼠尾成纤维样细胞中的表达高于鼠耳。结论：传代培养影响Igf2r基因的表达,Igf2r在不同部位来源的成纤维样细胞中的表达具有差异,为供核细胞的选择及后续的基因印迹研究奠定了基础。     

实时荧光定量POR检测传代培养细胞Grb10的表达

目的建立一种可靠的Grb10印迹基因实时荧光定量PCR方法，检测传代培养鼠尾成纤维样细胞中Grb10表达的差异。方法通过实时荧光PCR，选择合适的“相对标准品”绘制相对标准曲线，检测传代培养细胞中印迹基因Grb10的表达水平。结果相对标准曲线有较好的线性（r=0．999及0．984）；实时荧光定量PCR方法检测出随着细胞培养代数的增加印迹基因Grb10表达水平上升。结论双标准曲线的实时荧光定量PCR法用于检测Grb10的表达准确可靠；传代培养可能影响鼠尾成纤维样细胞中印迹基因Grb10的表达水平。     

人卵丘细胞GREM1基因表达与卵母细胞发育潜能关系研究

目的 探讨辅助生殖技术中人卵丘细胞GREM1基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系。方法 回顾性分析福建泉州市妇幼保健生殖医学中心2012年3月至2014年3月接受卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植（ICSI-ET)治疗的男方因素不孕妇女42例的160个卵母细胞,以形态学评分标准将正常受精的胚胎分为优质胚胎30个和非优质胚胎70个,移植后剩余胚胎冷冻保存或囊胚培养。根据卵母细胞成熟与否、D3 胚胎质量及D5/D6囊胚培养情况,实时荧光PT-PCR分别检测其卵丘细胞中GREM1表达水平的差异。结果 成熟卵母细胞的卵丘细胞GREM1表达水平比不成熟卵母细胞高（1.9739±0.5114 vs. 1.5105±0.2629,P<0.001）,同样在D3优质胚胎中,检测其卵丘细胞GREM1表达水平比非优质胚胎中的高（2.2693±0.4193 vs. 1.9263±0.4912,P<0.05）;进一步的囊胚培养发现,D5/D6 囊胚培养成功的卵丘细胞GREM1表达水平比失败组的明显升高（2.3874±0.2999 vs. 1.5943±0.2078,P<0.001）。结论    卵丘细胞GREM1表达水平与卵母细胞成熟及胚胎质量有关,成熟的卵母细胞与后期形成的胚胎质量密切相关,检测卵丘细胞GREM1表达可预测胚胎发育潜能。     

小儿过敏性紫癜外周血D二聚体的测定及临床意义

目的观察小儿过敏性紫癜(AP)外周血D二聚体与各器官损伤程度的关联性。方法对53例AP患儿按器官损伤情况分组进行D二聚体对比分析。结果伴有关节损害和脑损害为主型D二聚体阳性率最高,均为100%,其次为消化道损害为主型,为80%。单纯皮疹型阳性率最低,为50%。结论 AP患者的血浆D二聚体水平明显升高,且AP患者各器官受损程度及疾病进展与D二聚体水平有密切的关系。