结核分枝杆菌实时荧光重组酶介导的等温扩增检测方法的建立与应用

目的 由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的结核病(tuberculosis,TB)是全球第二大单一感染致死病因,快速和准确的结核诊断技术有助于对其进行精准防控。方法 针对MTB菌株插入序列IS6110高度保守区域设计引物和exo探针并进行筛选,建立了MTB实时(real-time,RT)荧光重组酶介导的等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法。通过检测11种非结核分枝杆菌以及金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌评价RT-RAA方法的特异性。以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR)方法作为平行对照,应用RT-RAA方法扩增梯度稀释的含有目的基因序列不同拷贝数的重组质粒p EASY-Blunt-IS6110,以评价RT-RAA方法的检测敏感度和重复性。将建立的MTB RT-RAA方法应用于173份肺结核临床样品检测中,同时与q PCR方法进行比较。结果 建立的MTB RT-RAA方法在42...     

结核分枝杆菌持留相关PcaA和Acr蛋白的表达纯化及初步应用

目的结核分枝杆菌(M.tb)潜伏感染状态是造成结核病诊断和研究的难点之一,目前的检测方法很难将潜伏感染结核病(LTBI)和活动性结核病(ATB)区分开.有文献报道分枝菌酸环丙烷合成酶(PcaA)和小分子热休克晶体蛋白(Acr)两个基因在M.tb持留状态下高表达,因此可能和菌的潜伏感染相关,有作为新的诊断靶标的可能,因此我们对它们开展了有关的研究和应用,以期为LTBI的诊断提供新的研究方向和方法.方法首先针对目的基因设计引物,从基因组上扩增其全序列,构建克隆和表达载体,纯化分离蛋白.将蛋白作为抗原应用于免疫学的检测,用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清中两种蛋白抗体的表达水平,最终经过统计学处理,分析LTBI和ATB患者之间的血清学的差异,寻找可应用于临床诊断分析的方法和策略.结果成功构建PcaA和Acr蛋白的克隆和表达载体,并获得表达和纯化的蛋白.血清的PcaA和Acr抗体水平检测结果显示健康对照(HC)与ATB之间差异有统计学意义,而ATB和LTBI之间差异并无统计学意义,即使将两个蛋白检测结果进行并联分析后也未显示差异有统计学意义.结论PcaA和Acr蛋白可以在大肠杆菌中成功表达并顺利纯化,PcaA蛋白有较高的抗原特异性和免疫反应性,可用于以后对结核病的检测分析中;虽然用血清学诊断时不能完整的区分LTBI和ATB,但可用于鉴别结核分枝杆菌感染与否.     

《方剂学》《中药学》与《药征》带给中医教育的反思

《方剂学》《中药学》是介于中医学基础与临床之间的桥梁学科.在对统编教材《方剂学》《中药学》及日本医家吉益东洞著作《药征》的学习和临床运用中,发现这些教材存在试图借助病因病机,模糊药物客观指征的现象,以酸枣仁汤、小青龙汤、济川煎等方剂以及酸枣仁、麻黄、桂枝等药物为例对此问题重点阐述.认为过于强调方剂或药物对应的病机在组方遣药治病中的重要性可能是症结所在,而相比之下《药征》对每昧药物分别从功效主治、考征、互考、辨误和品考这5方面进行论述,很好地弥补了当前《方剂学》《中药学》重病因病机,轻方证、药证之不足,对于今天临床用药遣方更有直接指导意义.故此提出,方证、药证应当分别是方剂学和中药学核心,寻找方药与其主治病证症状体征的对应关系是方剂学和中药学教学的关键,重视方药使用的客观证据指征是方药学的最大特色.     

调节性T细胞在调控抗结核免疫过程中的研究进展

结核分枝杆菌（MTB）作为一种胞内寄生菌,主要通过飞沫传播侵入人体,可导致人体多器官感染从而引起机体产生以T细胞为主导的抗结核免疫应答。调节性T细胞（Treg细胞）作为一类负向调节机体免疫反应的T淋巴细胞亚群,在宿主抗结核免疫中发挥着调控免疫平衡的重要作用。大量研究表明MTB特异性Treg细胞影响着结核病的发生、发展以...     

北京地区2008-2010年肺结核病复发流行病学和机制分析

目的研究北京地区肺结核病的复发情况,确定复发病例中内源性复燃和外源性再感染的比例。方法对北京各区县随机收取的4694例肺结核病临床病例进行回顾性研究,从中筛选出治疗痊愈后,间断6个月以上再次入院确定为复发的病例。对复发病例进行背景资料分析,分析和复发有关的风险因素;并且对复发病例临床分离株应用数目可变串联重复序列基因分型方法进行分析,确定复发形式。结果从4694例肺结核病临床病例中发现265例复发病例,复发率为67%;在复发风险上30~59岁年龄段和其他年龄段人群相比差异有统计学意义(OR=1.780,95%CI:1.406~2.255,P<005);复治患者和初治患者相比差异有统计学意义(OR=1.032,95%CI:1.010~1.054,P<005)。配对的复发病例中64%(37/58)为内源性复发,36%(21/58)为外源性再感染。结论在北京地区30~59岁年龄段人群、初始入院为复治的患者更容易出现肺结核病复发;复发病例主要为内源性复燃,同时也存在一定的外源性再感染和近期传播。     

细胞因子联合检测在结核病辅助诊断中的应用价值

目的 运用液相芯片检测研究对象血清中12种细胞因子IL-1β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-17,IFN-γ,IFN-α,TNF-α表达差异，探讨液相芯片技术用于活动性肺结核病诊断的应用价值。方法 选择3组人群为研究对象，包括37例活动性结核病患者，33例潜伏感染者和33例健康对照，运用液相芯片技术检测3组人群中12种细胞因子表达水平，统计各细胞因子用于肺结核诊断的灵敏度和特异度，最后进一步用统计学方法分析多个细胞因子联合检测的诊断价值。结果 活动性结核病组中的IFN-γ,IL-8,IL-6,TNF-α,IL-1β水平均高于结核潜伏感染组，差异有统计学意义（P <0.05）；活动性结核病组中的IFN-γ,IL-8,IL-6,TNF-α的表达水平高于健康对照组，差异有统计学意义（P <0.05）,IL-4,IL-5水平低于健康人群组，差异有统计学意义（P <0.05）。经ROC曲线，发现联合三个细胞因子IFN-γ,IL-8,IL-6诊断活动性结核病的AUC值为0.905；敏感度为75.70%，特异度为95.50%。...