加味楂曲饮防治实验性非酒精性脂肪肝药效学及其部分机制研究

目的研究加味楂曲饮(JWZQY)干预非酒精性脂肪肝(Non-Alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)的药效学及部分作用机制。方法 SDF级大鼠随机分为6组:空白组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。高脂饲料造模,对照组给予灌服等体积(0.038g/ml)复方蛋氨酸胆碱溶液,低、中、高剂量组分别灌服等体积含1,2,4 g/ml浓度JWZQY溶液,常规油红O法观察肝脏组织形态学改变,全自动生化仪测定血清丙氨酸基转移酶(Alanine Transaminase,ALT)、谷氨酸基转移酶(Aspartate Amino Transferase,AST)、甘油三酯(Triglycerides,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol,TC)水平,Elisa检测血清脂联素(Adiponection,ADP)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α),比色法检测血清游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)水平。结果高、中剂量JWZQY治疗后大鼠肝脏脂肪变程度明显减轻(P0.05);与模型组相比,阳性组及高、中剂量组大鼠血清中ALT、AST、TC、TG水平降低,差异有统计学意义(P0.01)。与阳性组比较,高剂量大鼠血清中ALT、AST、TC、TG水平降低,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,中剂量组ADP、TNF-α、FFA差异有统计学意义(P0.01)。结论 JWZQY可有效干预NAFLD,推测可能与其改善大鼠胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)、减少FFA生成有关。     

新HH方对HBV转基因小鼠脾脏源DC相关的免疫耐受状态影响的研究

目的:探讨新HH方对乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)转基因小鼠脾脏源树突状细胞(Dendritic cell,DC)相关的"免疫耐受"状态影响。方法:取新HH方治疗过和未治疗过的转基因小鼠脾脏来源的单个核细胞,以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant Mouse Granulocyte Macrophage-Colony Stimulatory Factor,rmGMCSF)和重组小鼠白细胞介素-4(Recombinant Mouse IL-4,rmIL-4)培养诱导DC,流式细胞仪检测其表面共刺激分子(CD80、CD86),MTT法检测其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,酶联免疫法(ELISA)法测定培养上清液中白介素-12(Interleukin-12,IL-12)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)水平。结果:新HH方组小鼠DC的表面协同刺激分子(CD 86)表达水平(13.7±3.1)、刺激同种异体淋巴细胞增殖能力(1:50和1:10 SI分别为1.22±0.09、1.69±0.10)和细胞因子IL-12水平(256.72±29.75)均高于对照组(154.69±11.32)(P<0.05),细胞因子IL-10水平(45.32±11.28)均低于对照组(76.79±16.26)(P<0.05)。结论:新HH方可以促进HBV转基因小鼠DC的成熟,上调其表面协同刺激分子CD86的表达,增强了其促淋巴细胞细胞增殖和分泌IL-12的能力,加强其抗原递呈能力,抑制分泌IL-10,从而打破DC相关的免疫耐受状态。     

从LOC440040、SYCP2L等mRNA角度探讨慢性乙型肝炎脾胃湿热证的客观化研究

【目的】从LOC440040、SYCP2L、MYH6、MDGA1、C17orf97、LIPC、ATOH8等mRNA角度确立慢性乙型肝炎(简称"慢乙肝")脾胃湿热证客观化辨证依据。【方法】研究对象分为2组:慢乙肝无症状者组、慢乙肝脾胃湿热证组,借助荧光定量PCR技术检测患者静脉血LOC440040、SYCP2L、MYH6、MDGA1、C17orf97、LIPC、ATOH8等mRNA水平。【结果】慢乙肝脾胃湿热证患者C17orf97、LIPC、ATOH8的mRNA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),而慢乙肝脾胃湿热证患者LOC440040、MDGA1、SYCP2L、MYH6的mRNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。【结论】LOC440040、SYCP2L、MYH6、MDGA1、C17orf97、LIPC、ATOH8等差异基因谱可以作为慢乙肝脾胃湿热证客观化的诊断标志物之一。     

加味楂曲饮防治实验性非酒精性脂肪肝的药效学研究

目的 研究加味楂曲饮（JiaWeiZhaQuYin,JWZQY）防治非酒精性脂肪肝病（Non-Alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD）的药效学。方法 SDF级大鼠随机分为6组：空白组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。空白组给予基础饲料,其余各组给予高脂饲料造模,自造模第1天起,空白组、模型组大鼠灌服等体积生理盐水,对照组灌服等体积复方蛋氨酸胆碱混悬液（0.038g/mL）,低、中、高剂量组分别灌服等体积JWZQY混悬液（JWZQY浓度相应为1g/mL、2g/mL、4g/mL）,8周后,常规油红O法（改良Lillie）观察肝脏组织形态学改变,全自动生化仪测定血清丙氨酸基转移酶（Alanine Transaminase,ALT）、谷氨酸基转移酶（Aspartate Amino Transferase,AST）、甘油三醋（Triglycerides,TG）、总胆固醇（Total Cholesterol,TC）水平,比色法检测血清游离脂肪酸（Free Fatty Acid,FFA）水平。结果 高、中剂量JWZQY治疗后肝脏脂肪变程度明显减轻（P＜0.05）;与模型组相比,对照组及高、中剂量组ALT、AST、TC、TG水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较,高剂量ALT、AST、TC、TG水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,中剂量组血清中FFA减少,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 JWZQY可有效防治实验性非酒精性脂肪肝,减少FFA生成,具有良好研究前景。     

加味楂曲饮对实验性非酒精性脂肪肝大鼠FFA-CYP2E1-MDA路径的影响

目的研究中药加味楂曲饮(JiaWeiZhaQuYin,JWZQY)对实验性非酒精性脂肪肝大鼠血清游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)、肝组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、肝组织细胞色素氧化酶P4502E1(Cytochrome P4502E1,CYP2E1)mRNA及蛋白水平的影响,以揭示其作用机制。方法 SDF级大鼠随机分为4组:空白组、模型组、低剂量组、中剂量组。空白组大鼠给予基础饲料,其余各组大鼠给予高脂饲料造模,自造模第1天起,空白组、模型组大鼠灌服等体积生理盐水,低、中剂量组分别灌服等体积含1g/ml、2g/ml浓度JWZQY溶液,8周后,采用比色方法检测血清FFA,采用TBA法检测肝组织MDA,荧光定量PCR法检测肝组织CYP2E1mRNA水平,Western Bloting法检测肝组织CYP2E1蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组、低剂量组的FFA、MDA水平明显升高(P0.01),模型组、中剂量组的CYP2E1 mRNA水平明显升高(P0.01,P0.05),模型组中CYP2E1蛋白表达丰度升高。与模型组比较,中剂量组FFA、MDA水平明显降低(P0.01),中剂量组CYP2E1mRNA水平明显降低(P0.05),中剂量组CYP2E1蛋白表达丰度明显降低。结论 JWZQY对模型大鼠血清FFA、肝组织CYP2El、MDA具有一定作用,推测JWZQY防治非酒精性脂肪肝的作用可能与抑制氧应激和脂质过氧化相关路径FFA-CYP2E1-MDA有关。     

HH胶囊的HPLC指纹图谱研究

目的建立HH胶囊的HPLC指纹图谱分析方法,拟定其指纹特征图谱指标成分群。方法高效液相色谱法测定,采用大连依利特ODS-BP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),检测波长230 nm;柱温30℃;流速1.0 m L/min;流动相:A相为0.1%磷酸溶液,B相为乙腈,进行二元梯度洗脱。结果最终标定14个特征峰构成HH胶囊的指纹图谱。通过与标准品对照,确定其中1号峰为没食子酸、8号峰为柯里拉京、9号峰为虎杖苷、10号峰为鞣花酸、13号峰为甘草酸、14号峰为齐墩果酸。结论 HPLC法准确、可靠,可为HH胶囊提供质量评价及鉴别依据,并为其物质基础研究提供了一定参考。     

基于“肾虚伏邪”理论论治HBeAg阳性慢性无症状乙型肝炎病毒携带者的临床观察

目的： 研究“肾虚伏邪”理论论治乙肝病毒e抗原（HBeAg）阳性慢性无症状乙型肝炎病毒携带者抗病毒疗效。 方法： 在“肾虚伏邪”理论指导下拟定中药复方温透解方。采用随机、对照方法,60例HBeAg阳性慢性无症状乙型肝炎病毒携带者随机分为治疗组35例、对照组25例,治疗组采用温补透解方治疗,对照组不给予任何药物,分别在治疗前、24,48周时采血检测肝功、乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）、乙肝标志物等指标,并观察血常规、尿常规、心电图等安全性指标变化。 结果： 24,48周时温补透解方降低血清HBVDNA（下降≥2 log10）作用明显强于对照组（P < 0.05,P < 0.01）,且具有时间依赖性（P < 0.05）,但仅在48周时温补透解方对HBVDNA转阴率高于对照组（P < 0.05）,未表现出时间依赖性。仅48周时治疗组HBeAg阴转率明显优于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）。温补透解方可以升高外周血CD4⁺T细胞数量、降低CD8⁺T细胞数量（P < 0.05）,恢复T细胞亚群比例。肝功、肾功、心电图等未出现明显变化,该方具有较好安全性。 结论： 温补透解方临床治疗HBeAg阳性慢性无症状乙型肝炎病毒携带者有一定的抗病毒作用,且安全,中医“肾虚伏邪”理论论治HBeAg阳性慢性无症状乙型肝炎病毒携带者安全、可行,可能与升高CD4⁺T细胞、降低CD8⁺T细胞有关。