连翘对岭南湿热模型小鼠的作用及其肠道菌群变化的研究

目的探究连翘对岭南湿热模型小鼠的作用及对模型小鼠肠道菌群的影响。方法将21只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、连翘组,每组7只。将模型组和连翘组放入人工气候箱[T:(30±0.15)℃,HR:80%～85%]每天12 h,隔日灌服白酒0.3 mL+跑步30 min,每日以高蛋白饲料喂养的"外湿+内湿+脾虚"的复合因素造模。造模49 d后,连翘组小鼠连续7 d进行连翘水溶液灌胃,模型组小鼠连续7 d超纯水灌胃。实验结束后用酶联免疫吸附法(ELISA)对各组小鼠血清、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)及内毒素(LPS)进行检测,对各组小鼠舌、小肠组织进行病理学检测,对粪便进行16s rRNA检测。结果与正常组比较,模型组小鼠血清TNF-α、IFN-γ、LPS含量增加(P 0.01,P 0.001);舌组织黏膜层角化增加并且有明显的过角质化突起,固有层结缔组织破坏明显;小肠组织黏膜层上皮细胞被破坏,固有层腺体损伤;肠道菌群结构发生紊乱,拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)所占肠道菌群的比例均有所增加(P 0.05),厚壁菌门(Firmicutes)所占比例减少(P 0.01);肠道有益菌普氏菌属(Prevotella)和颤螺菌属(Oscillospira)含量减少(P 0.05,P 0.01),致病菌大肠杆菌属(Escherichia)含量增加(P 0.05)。与模型组比较,连翘组小鼠血清TNF-α的含量有减少趋势,IFN-γ的含量减少明显(P 0.01),但血清LPS含量没有显著变化;舌组织黏膜层过角化突起没有改善,舌乳头排列较均匀,固有层形态规整;小肠组织黏膜层上皮细胞结构清晰,排列规则,固有层腺体结构清晰;肠道菌群结构改善,拟杆菌门所占比例降低(P 0.05),厚壁菌门所占比例升高(P 0.01);肠道有益菌普氏菌属和颤螺菌属含量增加(P 0.05),致病菌螺杆菌属(Helicobacter)含量降低(P 0.05)。结论连翘对中医湿热证有积极的治疗作用,能够治疗炎症,改善舌和小肠组织病变,降低肠道致病菌的含量并且对肠道菌群结构有调节作用。     

温病湿热证动物模型中炎症因子与水通道蛋白表达的实验研究

目的:采用复合多因素造模法,给予小鼠肥甘饮食、酒伤、劳役等方法并加以湿热外环境以建立湿热证小鼠模型,探讨湿热证中炎症反应与AQP之间的关系。方法:将40只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、脂多糖(LPS)组、湿热组、脾虚组,观察小鼠日常活动以及体征,测量小鼠每周体质量变化,采用HE染色检测舌部病理形态学变化。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中LPS和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;免疫组化法检测结肠组织中核转录因子κBp65(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)、水通道蛋白质(AQP)3和水通道蛋白质(AQP)4的阳性表达。结果:与正常组相比,LPS组、湿热组、脾虚组中LPS、TNF-α、NF-κBp65、TLR4、AQP3的表达升高(P0.001),AQP4的表达下降(P0.001);与LPS组相比,湿热组、脾虚组LPS、TNF-α的含量下降(P0.001),湿热组NF-κBp65、AQP4的表达升高(P0.05),脾虚组TLR4、AQP3、AQP4的表达升高。结论:湿热证小鼠LPS、TNF-α、NF-κBp65、TLR4的水平增高与水通道蛋白AQP3、AQP4关系密切,而LPS的在其中的机制有待进一步深入研究。