黄连解毒汤对健康大鼠肠道菌群结构影响的研究

[目的]研究黄连解毒汤对健康大鼠肠道菌群结构的影响。[方法]雄性Wistar大鼠20只依据体重分为空白对照组和黄连解毒汤组,每组各10只。黄连解毒汤组按照700mg/kg的剂量给予黄连解毒汤提取物溶液灌胃,空白对照组大鼠给予相同体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,两组均连续给药7d。7d后采用Illumina高通量测序技术检测两组大鼠的肠道菌群,寻找其中的差异菌群并对其进行生物学分析。[结果]在门水平菌群变化中,与空白对照组比较,服用黄连解毒汤临床剂量7d可以显著降低健康大鼠肠道中放线菌门和厚壁菌门细菌所占总菌的比例,两组差异具有统计学意义(P0.05)。在属水平上,可以显著性降低健康大鼠肠道中Adlercreutzia菌、消化链球菌和克里斯滕森菌所占的比例,两组差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。[结论]通过肠道菌群实验发现,黄连解毒汤临床剂量服用7d后可对健康大鼠的肠道菌群产生一定的调节作用。     

LPS诱导斑马鱼炎症实热模型构建及脂质生物标志物筛选研究

[目的]基于脂质组学技术,探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的实热炎症对斑马鱼体内脂质代谢的影响,并筛选出与炎症相关的差异脂质标志物。[方法]采用荧光标记转基因中性粒细胞斑马鱼,结合活体成像系统实时监测中性粒细胞炎症迁移过程,计算斑马鱼炎症部位中性粒细胞的个数。通过超高效液相色谱串联质谱(ultra performance liquid chromatography-Q exactive-mass spectrometry,UPLC-QE-MS)技术进行脂质组学检测,根据多元统计分析比较模型组与正常组斑马鱼的代谢谱图,寻找潜在生物标志物。[结果]模型组斑马鱼炎症部位中性粒细胞个数(18个)与正常对照组(2个)比较,差异有统计学意义(P0.001),显示LPS诱发转基因中性粒细胞荧光斑马鱼炎症模型建立成功。模型组和正常对照组的代谢谱图存在明显差异,并根据精确分子量及质谱碎片初步共筛选鉴定出28个差异代谢物,包括16个磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine, PC)、7个磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamines, PE)、2个磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)、1个磷脂酸(phosphatidic acid, PA)、1个磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol, PI)、1个鞘磷脂(sphingomyelin, SM)。[结论]卵黄囊显微注射LPS能够诱导斑马鱼产生感染性炎症,差异脂质代谢物以PC和PE为主,说明LPS诱导炎症的相关机制及相关的实热症状与PC和PE的代谢有关,可为疾病的早期诊断和预防奠定基础。     

基于非靶向代谢组学分析手工与机器煎药对八珍汤中化学成分的影响

目的:通过非靶向代谢组学方法研究手工与机器煎煮对八珍汤中化学成分的影响,寻找这2种不同煎药方式之间的差异性化学成分。方法:以规范化手工煎药与机器煎药2种方式对八珍汤进行煎煮,利用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等多元统计方法,结合变量重要性投影(VIP)值及t检验分析2种煎药方式对该复方中化学成分的影响。通过UPLC-LTQ-Orbitrap MS对差异性化合物进行分析,流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0～3 min,5%A; 3～7 min,5%～8%A; 7～9 min,8%～15%A; 9～17 min,15%～25%A; 17～27 min,25%～35%A; 27～29 min,35%～40%A; 29～35 min,40%～95%A),柱温30℃,流速0.4 mL·min-1;采用电喷雾离子源和正、负离子模式,扫描范围m/z 50～1 500。结果:在正、负离子监测模式下,共发现87个差异性成分,通过质谱数据结合文献报道,共识别并鉴定了其中的40个成分,包括洋川芎内酯A,甘草素,阿魏酸等。结论:手工与机器煎药获得的八珍汤煎煮液在色泽及化学成分上存在着较为明显的差异。若将二者的优点结合起来,在保持手工煎药优势的基础上,借鉴机器煎药包装药液的方式,建立规范的煎药流程,将使中药汤剂的药效得到最大程度上的发挥。