重组人白细胞介素11生物学活性测定方法研究

目的建立重组人白细胞介素 11(rhIL 11)生物活性测定方法。方法运用单克隆方法筛选出rhIL 11敏感细胞株T 10 ,采用溴化四唑蓝比色法进行rhIL 11生物活性测定 ,采用四参数方程对测定结果进行计算。结果以世界卫生组织国际标准品作为参照品 ,与美国Genetics公司rhIL 11上市产品NeumegaTM进行测定比较 ,结果显示国内同类产品与其生物活性一致 ,RSD均小于 10 %。结论此方法可用于rhIL 11生物活性测定     

重组人干细胞生长因子(rhSCF)生物活性测定方法研究

 目的 建立rhSCF生物活性测定方法。方法 分别采用MTT比色法与琼脂集落培养法进行rhSCF生物活性测定。结果 两种方法对同批次rhSCF成品测定结果无显著性差异。结论由于MTT比色法操作简便、稳定性好,可以替代琼脂集落培养法,使rhSCF测定更加准确、可行。     

人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物结构分析及活性研究

 目的确证人干细胞因子基因在大肠杆菌表达产物的正确性。方法通过蛋白质杂交，氨基酸末端序列分析，质谱分析及动物体内生物活性的研究，对人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物——重组人干细胞因子(rhSCF)分子进行了鉴定。结果大肠杆菌表达产物rhSCF N端15个氨基酸序列及C端2个氨基酸序列与理论推测一致，产物的相对分子质量为18 583.75，质量肽谱与理论序列的重叠率为98.2%，动物试验亦表明当与粒细胞集落刺激因子(G CSF)联用具有显著的外周血干(祖)细胞动员作用。结论人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物与理论推测完全一致，为其中试及临床试验奠定了基础。     

人受精促进肽受体(TCPllc)基因的克隆、表达及选择性剪接

目的 分离、克隆人受精促进肽受体TCPll基因1个新的转录本TCPllc的全长cDNA,研究其表达的阶段性、组织特异性及TCPll基因3种转录本的剪接方式。方法 运用BLAST方法获得与TCPlla同源的ESTs,以逆转录的人睾丸cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR扩增片段克隆入pGEM-T easy载体并测序;采用BLAST、ClustalW及RT-PCR方法分析各转录本的基因组结构及剪接方式;RT-PCR方法分析其组织表达的特异性和阶段性。结果 获得1个新的全长cDNA,它编码440个氨基酸的蛋白质,与TCPlla、b相比,在基因组的5′-端存在复杂的外显子剪接现象。RT-PCR结果显示该转录本在正常睾丸中表达,而其他组织、无精症患者及胎儿睾丸组织中未见该基因表达。结论 从人睾丸组织中分离到人受精促进肽受体TCPll基因1个新的转录本TCPllc, 结合mTcp-11的功能提示,TCPll基因a、b、c这3种转录本对精子发生和人受精过程可能起重要作用。     

幽门螺杆菌尿素酶A融合蛋白高效表达研究

目的高密度培养重组细菌和高效表达重组幽门螺杆菌尿素酶A融合蛋白。优化细菌培养和重组幽门螺杆菌尿素酶A融合蛋白表达的发酵工艺条件。重组细菌的培养条件：培养温度为35℃，培养基pH值为7．0～7．5，葡萄糖浓度为0．5％～2．0％，采用合理的策略控制发酵过程代谢副产物乙酸盐浓度不高于4mg/ml,，在BiofloⅢ发酵罐中，3批实验结果表明：重组细菌的平均生物量大约为60g/L发酵液(DCW)，重组幽门螺杆菌尿素酶A融合蛋白平均表达量为35％左右。