癌组织中p16基因甲基化分析

目的探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系.方法对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶(HpaII)和甲基非敏感酶(MspI)酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5'-CCGG-3'位点甲基化进行检测.结果20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例(25%)和9例(45%),正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例;有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌(Ⅲa、Ⅳ期各1例)中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者(P<0.05).结论p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件.     

电针对疼痛患者血浆及小鼠脊髓甲硫氨酸脑啡肽、强啡肽及痛阈的影响

目的 :探讨 4～5Hz电针下 ,患者血浆及小鼠脊髓的甲硫氨酸脑啡肽 (MEK)及强啡肽 (Dyn)的变化与疼痛的关系。方法 :将针灸门诊患者电针前后的血浆和随机分为电针、对照两组的雄性BALB/C小鼠的脊髓匀浆 ,分别定量点于硝酸纤维素膜上 ,应用免疫反应性蛋白质斑点印迹技术 ,用Shimadu薄层层析扫描仪进行检测。患者在电针前后、小鼠在电针 /牵拉前后均用测痛仪检测痛阈。结果 :电针后患者血浆D(MEK)及D(Dyn)均升高 (P <0 .0 1) ,而小鼠脊髓两者均降低(P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,患者血浆及小鼠脊髓的D(MEK)比D(Dyn)变动显著。血浆或脊髓的D(MEK)与D(Dyn)变动呈正相关。血浆及脊髓D(MEK)分别与痛阈呈正相关 (r=0 846 ,P <0 0 1)或呈负相关 (r=- 0 6 2 5 ,P <0 0 5 )。但血浆及脊髓的D(Dyn)与痛阈不相关。结论 :在较低频率电针下MEK可能在镇痛中起重要作用     

ACUPUNCTURE EFFECT ON GENE EXPRESSION OF c-fosmRNA, ppENKmRNA, iNOSmRNA AND iNOS ACTIVITY IN THE MOUSE SPINAL CORD

Ｉｔｗａｓｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｅｎｋｅｐｈａｌｉｎｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ(ＭＥＫＩＲ)ａｎｄｌｅｕｃｉｎｅｅｎｋｅｐｈａｌｉｎｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ(ＬＥＫＩＲ)ｗｅｒｅａｔｔｅｎｕａｔｅｄｉｎｔｈｅｇｕｉｎｅａｐｉｇ’ｓｓｐｉｎａｌｃｏｒｄａｆｔｅｒａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅｉｎｏｕｒｐｒｅｖｉｏｕｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ,ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｔｈａｔａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅｍａｙｉｎｄｕｃｅｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＭＥＫａｎｄＬＥＫｆｒｏｍｔｈｅｓｐｉｎ…     

电针及生物活性物质对大鼠多形核细胞杀菌功能的影响

用改良的四氮唑硝基蓝（ＮＢＴ）还原法观察了电针以及生物活性物质（ＢＡＳ）包括５－羟色胺（５－ＨＴ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）、生长抑素（ＳＯＭ）和Ｐ物质（ＳＰ）对大鼠多形核白细胞（ＰＭＮ）杀菌功能的影响。结果表明：电针及ＢＡＳ均能增强大鼠ＰＭＮ的杀菌功能（Ｐ＜０．０１）；ＢＡＳ对大鼠ＰＭＮ的杀菌功能具有双向调节效应。纳洛酮可阻抑电针对ＰＭＮ杀菌功能的提高（Ｐ＞０．０５）；可被ＢＡＳ所翻转。电针的镇痛效应和ＮＢＴ阳性细胞提高效应之间存在着明显的正相关（Ｐ＜０．０１）。     

大鼠肥大细胞异质性的免疫组织化学观察

大鼠肥大细胞异质性的免疫组织化学观察丰艳，吴景兰，王一菱河南医科大学组织学胚胎学教研室郑州４５００５２关键词肥大细胞；异质性；免疫组织化学目前对肥大细胞研究的焦点之一就是肥大细胞的异质性。作者对比观察了大鼠皮肤结缔组织肥大细胞（ＣＴＭＣ）和胃肠粘膜肥...     

银屑病患者指甲和鳞屑的蛋白质SDS-电泳图谱和转谷氨酰胺酶活性探讨

目的:探讨银屑病患者指甲和鳞屑蛋白质十二烷基硫酸钠(SDS)-电泳图谱和转谷氨酰胺(transglutaminase 1,TGase1)酶的活性.方法:各取5例银屑病患者的指甲和鳞屑与5例健康人的指甲和鳞屑,分别提取蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE).应用辣根过氧化物酶(HRP)-单丹酰尸胺结合物对鳞屑铺片标本检测TCase 1酶活性.结果:健康人指甲和鳞屑的SDS-PAGE图谱皆呈现4条主带:63 ku、54 ku、48 ku及38 ku,银屑病患者指甲及鳞屑的SDS-PAGE图谱也呈现此4条主带,但多数主带扫描数值的水平较高,P<0.01.健康人的鳞屑铺片标本TGase 1酶活性呈现为棕黄色细颗粒定位于角质深层角质形成细胞(KC)的周缘;相比之下银屑病患者的TGase 1酶活性缺乏.结论:指甲及鳞屑的SDS-PAGE主带相似,前者图谱更清晰可能与其蛋白较稳定有关.银屑病患者比健康人的SDS-PAGE图谱主带表达水平升高,提示其KC可能呈增生状态,表达产物较多;患者TGase 1酶活性的缺如提示其表皮屏障功能有缺陷,可能与其参与代偿性增生有关.     

槲皮素抗NIH-3T3细胞凋亡的作用

目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h,再换含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in。槲皮素后保护组(Qa):先用0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h。H2O2实验组(H2):先用含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24 h。取培养细胞提取DNA和制备1×107/m l细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率;应用细胞免疫组化技术检测Bc l-2、Bax、Caspase-3蛋白质的表达。结果:由TUNEL和Ladder实验得出,Qb组的细胞凋亡率明显低于H2组和Qa组。由细胞免疫组化技术检测分析得出,Qb组与Qa、H2组相比,Bc l-2的表达增高,Bax、Caspase-3的表达减低。结论:槲皮素可能是通过上调Bc l-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达,对H2O2诱导NIH-3T3细胞的凋亡起到抑制作用。     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景:睡眠剥夺是否引起细胞变性,其信号传导是否与某些基因调控有关。目的:探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验地点:郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠,雌雄不限,体质量(200±20)g,由河南省实验动物中心提供。干预:采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化,应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2,baxmRNA表达。主要观察指标:睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化;海马bcl-2和baxmRNA表达。结果:快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1,CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多,异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6.60±2.24)%,(1.69±0.45)%,(6.87±1.32)%,(1.74±0.98)%。CA1,CA3区细胞凋亡率和CA2,CA4区相比较差异有显著性意义(t=5.26～6.95,P<0.05)。bcl-2mRNA阳性信号表达积分值较强,四个区之间差异无显著性意义,baxmRNA表达增强犤CA1为(211.12±59.85);CA3为(205.56±56.99)犦与CA2和CA4区犤(123.42±22.80),(124.21±20.47)犦比较差异有显著性意义(t=3.20～4.36,P<0.05)。结论:睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡,与凋亡相关的bcl-2,baxmRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

8-Br-cAMP联合槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的逆转化作用

目的探讨8-Br-cAMP与槲皮素联合用药对人食管癌Eca-109细胞逆转化的作用。方法将培养的Eca-109细胞随机分为4组:①8-Br-cAMP组(Br):加终浓度为2×10-5mol/L8-Br-cAMP;②槲皮素组(Q):加槲皮素终浓度为43μmol/L;③8-Br-cAMP和槲皮素共同作用组(Br+Q):加终浓度为2×10-5mol/L8-Br-cAMP和终浓度为43μmol/L的槲皮素;④对照组(C):仅加DMEM培养液(含10%胎牛血清)。同时培养48h后分别对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜滴膜两种标本,进行Caspase-3和PCNA的免疫组化和免疫斑点印迹实验;应用完整细胞原位斑点印迹杂交技术检测c-myc、野生型p53(wtp53)、p16和EGFR的基因表达;并进行分化细胞/增殖细胞计数。结果8-Br-cAMP与槲皮素联合或单独应用均可上调Caspase-3免疫反应信号的表达,下调PCNA免疫反应信号的表达;同时上调wtp53和p16基因的表达,下调c-myc和EGFR基因的表达;且分化细胞的比率显著提高。结论8-Br-cAMP与槲皮素联合用药或单独用药均可通过调控人食管癌Eca-109细胞癌基因和抑癌基因的表达对Eca-109细胞起到生长抑制和促分化的作用。     

黄芪建中汤对慢性萎缩性胃炎大鼠表皮生长因子及其受体基因mRNA表达的影响

目的:观察EGF和EGFR在脾虚型慢性萎缩性胃炎(CAG)的表达及黄芪建中汤对其影响。方法:将24只W istar大鼠随机分为4组,①正常(C)组:作为正常对照组;②CAG组:6只大鼠以2%的水杨酸钠灌胃8w造成胃粘膜损伤,后4w结合饥饱失常、疲劳过度使大鼠致虚;③维酶素(V)组:6只已造模大鼠,使用维酶素治疗21d;④黄芪建中汤(RA)组:6只已造模大鼠,使用黄芪建中汤治疗21d。运用放射免疫法和原位杂交的方法检测各组实验大鼠胃粘膜组织EGF和EGFR-mRNA的表达量。结果:与正常大鼠相比,CAG组大鼠胃粘膜组织EGF和EGFR-mRNA的表达量显著增高(P<0.05),经黄芪建中汤治疗21d后,恢复至接近正常水平,而维酶素(V)组无明显变化。结论:EGF和EGFR-mRNA的过量表达可能是CAG胃粘膜肠上皮化生、异型增生乃至胃癌发生的关键因素之一,黄芪建中汤可以降低其表达而逆转其基本病变,其疗效显著优于维酶素(V)治疗组。