滋阴清热活血方联合激素对系统性红斑狼疮肾纤维化干预机制的研究

目的 研究滋阴清热活血方联合激素对MRL/lpr狼疮小鼠肾纤维化的影响，揭示该方抗狼疮肾纤维化效应机制。方法 将MRL/lpr自发性狼疮小鼠按尿蛋白水平平均分为5组:模型组、醋酸泼尼松组、滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组、滋阴清热活血方加激素半量组。药物干预4周后，H＆E染色和Masson染色分别检测狼疮小鼠肾组织病理学改变和肾纤维变化情况；免疫荧光法检测肾脏IgG免疫复合物沉积；Western blot法测定模型肾脏Smad4和Smad7蛋白表达水平。结果 与模型组比较，各治疗组小鼠肾脏病理损伤显著减少；Masson染色结果显示，与模型组比较，滋阴清热活血方组和醋酸泼尼松组胶原沉积减少；与滋阴清热活血方组比较，滋阴清热活血方加激素全量组和滋阴清热活血方加激素半剂量组胶原沉积面积均减少。免疫荧光染色检测结果显示，与模型组比较，滋阴清热活血方组和醋酸泼尼松组肾脏免疫复合物沉积减弱；与滋阴清热活血方组比较，滋阴清热活血方加激素全量和半量组肾脏IgG免疫复合物荧光显著减少。与模型组比较，滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组和激素半剂量组肾组织Smad4蛋白显著下降；滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组和激素半剂量组肾组织Smad7显著增加，其中，中药联合激素的2组尤为显著。结论 滋阴清热活血方联合激素对MRL/lpr小鼠肾组织肾纤维化具有较好的改善作用，其作用机制可能与抑制Smad4表达、上调Smad7蛋白表达有关，该研究为临床滋阴清热活血方联合激素治疗系统红斑狼疮肾纤维化提供了生物学依据。     

基于网络药理学探讨青蒿治疗狼疮性肾炎的作用靶点分析

目的 基于网络药理学探究青蒿治疗狼疮性肾炎的作用靶点及潜在作用机制。方法 通过TCMSP数据库检索出青蒿中所含有的化学有效成分及作用靶点,并经Uniprot数据库进行名称标准化处理。再利用OMIM和GeneCards数据库检索LN相关基因,利用R软件绘制韦恩图并筛选出青蒿治疗LN的共同作用靶点,利用String数据库构建蛋白互作PPI网络,利用Cytoscape 3.8.0软件构建药物-疾病-靶点网络可视图并筛选出核心基因,对共同作用靶基因进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果 从青蒿中筛选得到22个有效成分,去除重复靶点得青蒿靶点42个,LN中相关靶点有842个,利用韦恩图筛选出药物-疾病共同靶点10个。GO功能富集分析显示青蒿治疗LN生物学过程和功能主要集中在细菌反应、膜微区、细胞因子受体结合、信号受体调节活性等。KEGG通路富集分析显示,青蒿治疗LN主要与AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力、TNF信号通路、血脂和动脉粥样硬化、PI3K/AKT信号通路和IL-17信号通路等相关。结论 通过分析药物主要活性成分,构建PPI网络和青蒿-活性成分-靶点-疾病网络图并进行GO功能富集和KEGG通路富集分析,揭示青蒿治疗LN具有多成分、多靶点和多通路的作用特点,为青蒿临床应用治疗LN的机制提供了思路和方法。     

蠲痹颗粒醇提物抑制Th17 细胞表达治疗类风湿关节炎作用机制研究

目的：研究蠲痹颗粒醇提物抑制致病性Th17细胞表达治疗类风湿关节炎(RA)的作用机理,阐述扶阳学派及吴生元教授运用扶阳理论治疗RA的分子机制。方法：构建牛Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎(CIA)模型,模型小鼠按随机数字表法分为CIA模型组(Model组)和蠲痹颗粒醇提物干预组(JBKL组)各10只。苏木精-伊红(HE)染色检测CIA小鼠关节炎病理损伤程度;流式细胞术检测Th17、Treg细胞表达水平;荧光定量PCR法检测Th17细胞相关基因的表达。结果：与Model组比较,JBKL组小鼠关节组织学评分降低(P<0.05)。与Model组比较,JBKL组Foxp3⁺CD4⁺T (调节性T细胞)表达水平上调(P<0.05)。与Model组比较,JBKL组小鼠脾淋巴细胞IL-17⁺CD4⁺比例降低(P<0.05),Treg/Th17比值增加(P<0.05)。JBKL组小鼠脾淋巴细胞IL-17A、IL-23p19、IL-21、IFN-γ的mRNA表达水平低于Model组,Th17...     

蠲痹颗粒醇提物调控MAPK信号转导抑制T细胞活化效应机制的研究*

目的 探讨蠲痹颗粒醇提物（JBKL）在丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号转导通路中抑制T细胞活化的效应机制，揭示扶阳学派应用扶阳理论治疗类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的现代免疫学机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测JBKL对伴刀豆球蛋白（Con A）、脂多糖（LPS）诱导T、B脾淋巴细胞增殖活性及细胞毒性的影响；建立体外抗CD3单克隆抗体（Anti-CD3 mAb）诱导的T细胞活化模型，MTT检测JBKL对T细胞体外活化增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）测定干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-17A（IL-17A）、IL-10和IL-6在细胞上清中的含量；蛋白质印迹法（Western blot）检测体外纯化CD4+ T细胞中ERK和p38蛋白的磷酸化水平。结果 JBKL在浓度30 μg/mL时显著抑制Con A、Anti-CD3 mAb和LPS诱导的T细胞和B细胞增殖功能；JBKL在浓度（3~30） μg/mL时对正常脾淋巴细胞无明显的细胞毒性作用，明显下调IFN-γ、IL-17A和促炎因子IL-6的含量，而促进IL-10的分泌；JBKL在浓度100 μg/mL时抑制MAPK信号通路，可降低纯化CD4+ T细胞磷酸化ERK和p38蛋白的表达。结论 JBKL阻碍T细胞介导的免疫反应，减少MAPK信号通路磷酸化ERK和p38蛋白表达，可能是其治疗RA的重要分子机制之一。     

黄芪甲苷调控CD45 PTPase介导抗脓毒症免疫机制的研究

目的 研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI IV)抗脓毒症效应及免疫学机制,为黄芪临床应用脓毒症治疗提供科学依据。方法 采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组、Anti-CD45单抗组、Anti-CD45单抗+黄芪甲苷组。H＆E染色检测肺组织病理损伤;流式细胞术检测脾脏Th1细胞表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Th1细胞相关基因(IL-2、T-bet、STAT1和STAT4))mRNA的表达。结果 与模型组比较,黄芪甲苷干预显著提高脓毒症模型小鼠生存率,减轻模型小鼠肺组织病理损伤。CD45抗体干预后,阻断了黄芪甲苷提高生存率和减轻肺组织病理损伤的作用。机制研究结果表明,黄芪皂苷显著增加模型小鼠Th1 细胞( CD4+ IFN-γ+ ) 比例,上调Th1细胞相关基因(IL-2、T-bet、STAT1、STAT4)mRNA表达,CD45抗体干预后,减少了黄芪甲苷促脾淋巴细胞Th1 细胞比例,阻断黄芪皂苷促Th1细胞相关基因。结论 黄芪甲苷通过调控CD45分子,提高Th1细胞介导的免疫反应,介导抗脓毒症效应。