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目的建立并确证可以检测1-磷酸鞘氨醇(S1P)快速、灵敏、特异的LC-MS/MS定量分析方法。方法采用C17-S1P作为内参,甲醇一步法进行蛋白沉淀,随后进行正相电喷雾离子化LC-MS/MS分析。流动相为甲醇-0.1%甲酸水(95∶5,v/v),流速0.2mL/min,每个样品的分析时间为4min。细胞经TNF-α处理后S1P含量显著增加;而经DMS处理后S1P含量显著下降。结果 S1P的标准曲线线性范围为0.1~10ng/mL。相关系数r2均大于0.989。结论该方法可以快速,灵敏,特异性地同时检测生物样品中S1P的含量。 相似文献
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目的建立并确证一种快速、灵敏、高效的测定生物样品中SphK1活性的液质联用(LC-MS/MS)分析方法。方法采用C17-Sph作为底物,通过测定产物C17-S1P的生成量来评价SphK1的活性进行体外酶促反应。终止反应后,生物样品经液-液萃取,真空干燥,复溶,进行LC-MS/MS分析。通过测定产物C17-S1P的生成量来评价SphK1的活性。结果 C17-S1P标准曲线的线性范围为10~1 000 ng mL-1,相关系数r2〉0.998,最低检测限(LLOQ)为10 ng mL-1。HEK293细胞转染了野生型SphK(SphKWT)后,SphK1活性显著增加。相反HEK293细胞转染了突变型SphK(SphKG82D)后,SphK1活性接近正常水平。结论该方法能够灵敏快速地测量SphK1活性,为研究SphK1信号通路及其相应靶标药物提供了有效的分析手段。 相似文献
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目的:建立可以快速检测人血浆中1-磷酸鞘氨醇(S1P)的LC-MS/MS定量分析方法。方法:采用C17-S1P作为内参,甲醇一步法进行蛋白沉淀,随后进行正相电喷雾离子化LC-MS/MS分析。流动相为甲醇-0.1%甲酸水(95∶5,v/v),流速0.2ml/min,每个样品的分析时间为4min。结果:对于所有的质控样品,批内和批间精确度均小于12%。测定人血浆S1P的浓度为67.6ng/ml。结论:该方法可以快速、灵敏、特异性地检测血浆中S1P的含量。 相似文献
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