基于“以方测证”理论从AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路探讨雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型的中医证候属性

目的 采用雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型,基于“以方测证”理论从腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子（AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF）信号通路探索该模型的证候属性。方法 将48只具有规律动情周期大鼠随机分为正常组（n=8）和造模组（n=40）,造模组大鼠连续灌胃雷公藤多苷混悬液（75 mL·kg^-1）30 d,造模后将其分为模型组、四物汤组（3.69 g·kg^-1）、右归饮组（3.11 g·kg^-1）、左归饮组（7.29 g·kg^-1）和归肾丸组（10.35 g·kg^-1）,每组8只。相应药物干预14 d。巴氏染色检测各组大鼠动情周期变化;体视镜观察卵巢组织形态;苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理学及卵泡计数;酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）及雌二醇（E₂）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,次级、成熟卵泡减少,闭锁卵泡增多,FSH、LH、AMPK mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,E₂含量,mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,归肾丸组次级、成熟卵泡增多,闭锁卵泡减少,FSH、LH含量、AMPK mRNA表达及蛋白表达显著降低（P<0.01）,E₂含量、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA表达及蛋白表达显著升高（P<0.01）。与归肾丸组比较,四物汤组、右归饮组、左归饮组成熟卵泡数量显著减少,闭锁卵泡数量显著增多（P<0.01）;四物汤组、右归饮组、左归饮组LH显著升高（P<0.01）,FSH明显升高（P<0.05）,E₂明显降低（P<0.05）;右归饮组AMPK蛋白表达明显升高（P<0.05）,mTOR和HIF-1 mRNA表达显著降低（P<0.01）,VEGF蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.01）;四物汤组mTOR和HIF-1 mRNA,VEGF蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05）;左归饮组mTOR mRNA和VEGF蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05）。结论 归肾丸可以抑制AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路来改善卵泡发育不良大鼠模型的卵巢功能、促进卵泡成熟,且总体疗效优于左归饮、右归饮和四物汤,表明该模型的证候更符合肾精亏虚证。     

中药调控水通道蛋白表达的研究进展※

津液代谢失调会导致疾病的产生,中药治疗津液代谢失常类疾病效果显著,其作用机制为近年来的研究热点。水通道蛋白是细胞水液进出的重要通道,参与机体水液代谢。研究表明中药调控水通道蛋白表达进而调节机体水液代谢是中医治疗津液代谢失常类疾病的机制之一,文中综述了单味中药及中药复方调控水通道蛋白的作用机制,以期为今后的研究提供借鉴。