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目的 研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的调控作用。方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,确定最佳给药时间及给药浓度,用于后续实验;设置空白组、桦木酸低、中、高浓度组。采用苏木素-伊红(HE)染色观察桦木酸对SW620细胞形态的影响。采用Annexin-V/碘化丙啶(PI)双染法检测SW620细胞凋亡率。分别采用Hoechst33258染色及细胞自噬染色(MDC)观察细胞凋亡和自噬体发生情况。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3),微管相关蛋白Ⅰ轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬关键分子酵母Atg6同系物-1(Beclin-1)、p62、磷酸化(p)-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果 桦木酸以浓度、时间依赖性的方式抑制SW620、HT29、HCT116细胞的活性;与桦木酸给药24 h比较,W620、HT29、HCT116细胞给药48 h细胞活性明显降低(P<0.05,P<0.01),给药48 h的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),其中SW620细胞给药48 h的IC50最小。HE染色、Hoechst33258染色显示,桦木酸组可见浓度依赖性细胞凋亡;MDC染色可见细胞自噬体数量增加。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组Bax、Caspase-9、cleaved Caspase-3、LC3Ⅱ蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),桦木酸中、高浓度组Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.01);桦木酸低、中、高浓度组p62、p-Akt、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 桦木酸对SW620细胞活性有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导人结肠癌细胞SW620的凋亡及自噬有关。 相似文献
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