美利复合剂局部封闭治疗陈旧性肛裂182例临床观察

目的观察和提高陈旧性肛裂(Ⅱ、Ⅲ期为主)的治疗效果。方法采用亚甲兰、利多卡因、肾上腺素复合剂加维生素B12局部封闭治疗陈旧性肛裂182例。并设对照组(用维生素B12+利多卡因)治疗陈旧性肛裂186例。结果治疗组182例中,痊愈178例,占97.8%,未见不良反应及并发症,随访123例,复发10例(8.1%);对照组186例中,痊愈125例,占67.2%,随访113例,复发59例(52.2%),复发及无效病例经美利复合剂重复治疗后痊愈。2组的差异有统计学意义(2=57.13,P<0.01)。结论美利复合剂对陈旧性肛裂有确切的疗效。     

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的:研究miR-23a和上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的表达,以及对体外直肠癌细胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁组织中的表达,免疫组化检测ESRP1在直肠癌组织中的表达,分析miR-23a和ESRPl在直肠癌组织中的相关性;利用RT-q PCR检测miR-23a在直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a inhibitor和inhibitor阴性对照(inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞活力的影响,流式细胞术检测转染后细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭;通过Western blot技术检测SW480细胞中ESRPl蛋白的表达;构建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)质粒,并分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染至HEK293和SW480细胞中,利用双萤光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双萤光素酶活性;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表达的影响。结果:miR-23a和ESRP1在直肠癌组织的表达较癌旁正常组织分别上调和下调,两者呈明显负相关(P0.01);miR-23a的表达与直肠癌的淋巴结转移和肿瘤浸润深度相关;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调(P0.01);转染miR-23a inhibitor后,SW480细胞活力较inhibitor NC组显著下降(P0.01);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显升高,同时细胞体外侵袭能力受到抑制;萤光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高;ESRP1 mimic转染SW480细胞后可抑制细胞活力并诱导细胞凋亡,同时上调caspase-3和Smac的表达,下调XIAP的表达。结论:miR-23a可通过负向调控下游靶基因ESRP1从而影响直肠癌细胞生长和凋亡。     

PTEN在白藜芦醇对体外直肠癌细胞生长和凋亡的影响

分析第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在直肠癌细胞系中的相对表达水平,以及白藜芦醇对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。利用Western blot检测PTEN在人直肠癌细胞株Caco-2和SW480及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;不同浓度的白藜芦醇作用体外SW480细胞后,CCK-8法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响;Western blot检测Caspase-3,PTEN,p53以及AKT蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建慢病毒介导特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调SW480细胞中PTEN的表达,检测下调PTEN的表达后是否影响白藜芦醇对体外直肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。结果表明,与NCM460细胞相比较,PTEN在Caco-2和SW480中的表达量均显著下调,差异有统计学显著性(P0.001);白藜芦醇对体外直肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞凋亡;白藜芦醇对SW480细胞中Caspase-3,PTEN和p53蛋白的表达均有明显上调作用,而抑制磷酸化AKT的表达;shRNA PTEN可明显下调PTEN在SW480细胞中的表达,同时降低白藜芦醇对SW480细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。提示白藜芦醇可通过上调PTEN的表达从而调控体外直肠癌细胞增殖和凋亡。     

miR-23a调控ESRP1干预直肠癌细胞增殖和凋亡

目的 分析微小RNA-23a （microRNAs-23a,miR-23a）在直肠癌组织及细胞系中的相对表达水平,以及miR-23a对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。方法 采用qRT-PCR检测miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;利用qRT-PCR检测miR-23a在直肠癌SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a抑制剂（inhibitor） RNA片段和抑制剂阴性对照RNA片段（inhibitor negative control,inhibitor NC）,并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率;Western blot法检测上皮剪接调节蛋白1（epithelial splicing regulatory protein 1,ESRPl）蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建野生型pGL3-ESRP1-3''UTR （wt-pGL3-ESRP1-3''UTR）或突变型pGL3-ESRP1-3''UTR （mut-pGL3-ESRP1-3''UTR）质粒,HEK293和SW480细胞经上述质粒分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染后测定双荧光素酶活性。结果 与癌旁正常组织相比较,miR-23a在直肠癌组织中的相对表达水平明显上调,差异有统计学意义（P=0.000）;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调,差异有统计学意义（P=0.000）;SW480细胞转染miR-23a inhibitor后,细胞增殖较inhibitor NC组下降35.54%±5.27%,两组结果差异有统计学意义（P=0.000）;转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显高于inhibitor NC组（P=0.000）;荧光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;SW480细胞转染inhibitor NC后对ESRP1蛋白表达无明显影响,而转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高。结论 miR-23a在直肠癌组织和细胞系中的表达均显著升高,miR-23a可通过下游靶基因ESRP1从而调控直肠癌细胞增殖和凋亡。