利用随机扩增多态性DNA技术分析刺五加的遗传多样性

目的从DNA水平对收集的4个产地的刺五加进行遗传多样性分析，为更好地开发利用刺五加资源奠定基础。方法随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析遗传多样性，UPGMA进行聚类分析。结果10个随机引物扩增得到72条片段，多态性位点比率为88．89％。不同产地间的遗传相似系数在0．4693—0．7851之间，均值为0．6293，同一产地不同居群间的遗传相似系数在0.5630-0.9542之间，均值为0.7644。不同产地刺五加之间的遗传多样性高于同一产地不同居群的个体，其中产地穆棱的刺五加与产地和龙、本溪、尚志之间的相似性较低，单成一支。产地之间的相似性与地理距离呈不完全相关性。结论刺五加种群内部具有较高的遗传多样性，利用RAPD技术分析刺五加的遗传多样性是可行的。     

HPLC法测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量

[目的]建立刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量的测定方法.[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量.[结果]在同一色谱条件下,刺五加苷B在2.76～43.92μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9998,回收率98.7%,RSD为1.8%;刺五加苷E在2.34～37.52μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9996,回收率为101.9%,RSD为2.0%.[结论]该分析方法简便、准确、重现性好,可用于刺五加药材中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定.     

淡豆豉多糖提取中脱蛋白和脱色的实验研究

淡豆豉是豆科植物大豆Glycine max（L.）Merr.成熟种子的发酵加工品。淡豆豉作为药用早有记载，也是历版《中国药典》的收录品种。在药用方面，淡豆豉作为传统中药用于治疗感冒、寒热头痛，烦躁胸闷，虚烦不眠等症。近年来，植物多糖具有药物活性已有广泛报道，许多多糖物质在抗凝血、抗血栓、调血脂、调节免疫功能和抗肿瘤等方面都有显著的药理作用与疗效。从淡豆豉中提取的淡豆豉多糖也具有一定的药物活性，如清除自由基、降血糖的作用等。     

PLC法测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量

[目的]建立刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量的测定方法。[方法]采用高效液相色谱（HPLC）法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量。[结果]在同一色谱条件下，刺五加苷B在2.76—43.93μg·ml^-1范围内线性关系良好，r=0.9998，回收率98.7％，RSD为1.8％;刺五加苷正在2.34-37.52μg·ml^-1范围内线性关系良好，r=0.9996，回收率为101.9％，RSD为2.0％。[结论]该分析方法简便、准确、重现性好，可用于刺五加药材中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定。     

近视儿童发锌含量的测定

微量元素锌是人体必需元素 ,头发中微量元素是组织中蓄积或析出机体的微量元素记录器[1] ,因此 ,常利用人发中某些微量元素的变化来研究微量元素和疾病的关系。我们分析了近视儿童中发锌的含量 ,以探讨微量元素锌的生理作用与近视的关系。1　对象与方法1.1.　对象　 2 0 0 0年 5— 6月收集 39例身体健康、无其他疾病的近视儿童的头发样品 ,其中男童 2 3例 ,女童 16例 ;对照组 35例 ,男童 18例 ,女童 17例。二组儿童年龄 6～ 11岁。视力检查 ,正视眼≥ 1.0 ,近视眼 0 .8～ 0 .1之间。经散瞳验光- 1.0 0～ 8.0 0Ｄ之间 ,平均 - 3.0 0Ｄ。1.2.…     

高血压病患者发中微量元素的分析

为探讨高血压病患者与微量元素的关系 ,我们测定了 6 5例高血压病患者与 5 0例正常人发中铜 ,锌 ,铁的含量 ,结果报告如下。1　对象与方法1.1　研究对象　高血压病 (观察 )组 :6 5例 ,其中男 30例 ,女35例 ,年龄 4 1～ 75岁 ,平均 6 2 .5岁。对照组 :体检健康 ,无其他疾病共 5 0例 ,其中男 2 2例 ,女 2 8例 ,年龄 4 1～ 70岁 ,平均 5 0 .9岁。1.2　方法　用不锈钢剪刀 ,在所选对象的头枕部贴头皮处剪取约 2ｃｍ长的发根 1ｇ左右 ,金鱼牌洗涤剂浸泡洗涤 ,用去离子水冲洗干净 ,在烘箱中烘干 ,准确称取烘干的发样 ,置于干净的小烧杯中 ,加优级…     

高效液相色谱法测定不同产地刺五加根、茎中绿原酸的含量

目的采用高效液相色谱法(HPLC)测定三种产地的刺五加根、茎中绿原酸的含量。方法用50%甲醇回流提取绿原酸;色谱柱:Kromasil ODS柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙睛—0.1%磷酸水溶液(0～5min,10︰90;5～23min,10︰90～15︰85);流速:0.8ml/min;检测波长:254nm。结果刺五加中绿原酸的线性范围为2.208～11.04μg/ml(r=0.996);平均回收率为97.5%,RSD为2.61%。结论 HPLC测定方法操作简便、准确、重复性好,为刺五加药用成分的含量测定及其制剂的质量控制提供研究基础。     

刺五加鲨烯合酶和鲨烯环氧酶基因单核苷酸多态性及其与总皂苷量的相关性研究

目的 筛选刺五加鲨烯合酶(SS)和鲨烯环氧酶(SE)基因存在的单核苷酸多态性(SNP)位点,分析各SNP位点与刺五加总皂苷量的相关性.方法 采用分光光度法测定刺五加总皂苷的量,并划分为具有显著差异(P＜0.01)的高、低量组;RT-PCR法扩增刺五加SS、SE基因,根据测序结果筛选SNP位点,利用R×C表的x2检验分析相关关系.结果 刺五加SS基因存在6处SNP,其中704 bp位点为错义突变,其他位点为同义突变,各位点均不与刺五加总皂苷量显著相关.SE基因存在9处SNP,其中导致错义突变的164、199、227、232 bp位点及同义突变的279、285 bp位点与刺五加总皂苷量显著相关(P＜0.05),其他位点为同义突变,与刺五加总皂苷量间无显著相关性.结论 刺五加SS和SE基因存在SNP,SE基因164～285 bp位点的AGAACG与刺五加总皂苷高量组显著相关,TAGTTC与低量组显著相关.     

体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究

目的 探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系.方法 将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响.结果 体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织.2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量.MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基.结论 刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度.     

内生真菌对刺五加皂苷合成关键酶基因表达及 皂苷含量的影响

目的:分析刺五加内生真菌菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1对刺五加中皂苷合成关键酶基因SS(squalenesynthase),SE(squalene epoxidase),bAS(β-amyrin synthase)表达量和皂苷含量的影响。方法:伤口法回接内生真菌。以GAPDH为内参照基因,Real time PCR法检测关键酶基因表达量的变化。分光光度法测定刺五加的总皂苷含量。结果:回接P116-1a和P116-1b 30 d,刺五加SS基因的表达量显著提高(P<0.05),P109-4和P312-1无显著变化,之后出现降低-相等-降低的变化趋势。回接菌株P312-1 30 d,刺五加SE的表达量显著提升(P<0.05),回接菌株P116-1b和P312-1 90 d,SE的表达量分别显著提升至对照的130%,161%(P<0.05)。回接120 d,4个菌株处理的SE表达量均显著高于对照(P<0.05)。各处理bAS的表达量在回接60～120 d时均显著高于对照(P<0.05)。4个菌株均显著提高了刺五加的皂苷含量(P<0.05)。结论:菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1可显著影响刺五加SS,SE,bAS的表达量,进而影响刺五加的皂苷含量,其中bAS为主要靶点基因。