人ARPC2基因的克隆与表达

目的 构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体，并在原核细胞中进行表达与纯化．以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中。对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株，用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达，并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果 所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的，该载体可在大肠杆菌内高效表达，用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白。结论 成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体，并在原核细胞中获得了高效表达和纯化，为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。     

Toll样受体4与心血管疾病

Toll样受体是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体 ,在天然免疫反应中具有重要的作用。TLR4是介导LPS信号跨膜转导的主要受体 ,对于革兰氏阴性菌的感染性炎症至关重要。由于心血管疾病的发生和发展与感染密切相关 ,近来 ,有关TLR4及其介导的信号转导在心血管疾病发病中的作用受到人们的关注。深入研究TLR4在心血管疾病中作用 ,不仅能极大地扩展我们对病原体与宿主免疫反应之间相互作用复杂性的认识 ,更能为进一步揭示心血管疾病的发病机制 ,寻求有效的防治措施提供重要的理论基础。     

严重急性呼吸综合征患者细胞因子与趋化因子表达谱的特征

由于严重急性呼吸综合征(SARS)的免疫病理机制尚未阐明,目前尚无有效药物或治疗方法能够控制这种疾病.为了探讨SARS发病的免疫学机制,我们研究了SARS患者外周血细胞因子与趋化因子的表达谱以及肺和淋巴组织的免疫病理改变.采用液相芯片技术,动态扫描了23例诊断明确的SARS患者血中14种细胞因子与趋化因子;应用反转录PCR、免疫组化和免疫荧光技术对SARS死亡患者经尸体解剖的肺和淋巴组织进行免疫病理学观察.     

组蛋白修饰对炎症反应的调控

表观遗传学（epigenetics）是指在基因的DNA序列不发生改变的情况下,基因的表达水平与功能发生改变,并产生可遗传表型的遗传现象。表观遗传学的研究内容主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码RNA调控等。     

HPC2真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

目的 构建在哺乳动物细胞中表达的HPC2真核表达载体，并分析其在HEK293细胞中的表达。方法 从重组pcDNA3／HPC2载体上将HPC2cDNA序列亚克隆至带有flag标记的真核表达载体pcDNA3-flag上，经PCR、酶切和测序鉴定，将重组质粒pcDNA3-flag／HPC2用脂质体瞬时转染HEK293细胞，细胞裂解后，用Western blot分析并观察HPC2在HEK293细胞中的表达情况。结果 PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-flag／HPC2构建正确，并可在HEK293细胞内高效表达。结论 成功构建了pcDNA3-flag／HPC2真核表达载体，该载体能在哺乳动物细胞中有效表达，为进一步研究HPC2的功能提供了重要的实验材料。     

病理生理学教学改革探讨

将最新科研成果及时充实到教学中,对于提高病理生理学的教学质量具有重要意义。通过将自身的科研成果融入到病理生理学的教学中,不但显著提高了病理生理学的教学质量,更为重要的是培养了学生的学习兴趣、科研思维和创新精神。     

髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠的构建与鉴定

目的　利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。 方法　将引进的Setd4flox/+小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4flox/flox的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4fl/+/flp小鼠;然后分别与C57BL/6小鼠交配去除FLP酶,筛选出Setd4fl/+小鼠;与Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4fl/+/Lyz2-Cre小鼠;将得到的Setd4fl/+和Setd4fl/+/Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4-/-/Lyz2-Cre小鼠,即髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型;实时荧光定量PCR技术检测小鼠腹腔巨噬细胞及肝组织中SETD4 的mRNA表达水平验证敲除情况。 结果　髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞中SETD4 mRNA水平较野生型小鼠显著降低;而在肝组织中无显著差异。 结论　利用FLP/FRT、Cre/Loxp系统成功构建髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为后续的功能学研究提供了动物模型。     

SETD4对脂多糖诱导的AML12细胞IL-6转录的调控作用

目的　探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）对脂多糖（LPS）诱导的AML12（小鼠肝脏细胞系）细胞IL-6的转录调控作用。 方法　构建SETD4表达质粒和IL-6 启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基因技术检测LPS刺激后IL-6 启动子荧光素酶活性;单独转染SETD4表达质粒上调AML12细胞SETD4表达,检测LPS刺激后IL-6 mRNA水平变化。 结果　双酶切鉴定及核酸测序证实重组质粒pcDNA3.0/HA-SETD4、pGL3.0/IL-6 promoter的构建成功。pcDNA3.0/HA-SETD4与pGL3.0/IL-6 promoter共转染AML12细胞,LPS刺激后SETD4对IL-6 启动子荧光素酶活性没有影响;上调SETD4表达后,可以促进LPS诱导的IL-6 mRNA转录。 结论　成功构建SETD4真核表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒;SETD4对LPS诱导的AML12细胞IL-6的转录发挥正调控作用。     

免疫训练——先天免疫记忆的发现和研究进展

免疫系统分为先天免疫(又称固有免疫或非特异性免疫)和获得性免疫(又称适应免疫或特异性免疫),主要功能是防止病原微生物入侵和清除已入侵病原微生物及其他有害物质.传统观念认为,先天免疫与获得性免疫的重要区别在于后者有免疫记忆.然而,新近研究发现固有免疫细胞在受到病原微生物及其产物刺激后,当再次遭遇感染时,可表现出对原刺激或...