沉默ERRα对过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染的MG63细胞影响研究

目的:探讨雌激素相关受体α(ERRα)对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)过表达腺病毒载体转染的MG63细胞和相关蛋白Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的影响作用。方法:将培养好的MG63细胞经过表达DKK1、Sost转染后分为空白对照组、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达(DKK1+Sost)组,根据组别不同用包装好的沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染后的MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度,Western blot检测MG63细胞中Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白的表达量。结果:①与空白对照组比较,过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组、沉默ERRα干预空载腺病毒组的高细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。②与过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组比较,沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组的细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:沉默ERRα可降低过表达DKK1、Sost重组腺病毒转染后的MG63细胞增殖和ALP活性,升高钙离子浓度,对Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白表达有一定影响作用,尤其对DKK1、Sost同时过表达时的作用最为明显。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠BMP2/Smad信号通路的影响

目的:研究补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad信号通路的影响。方法:72只6月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(24只),手术组(48只),双侧卵巢切除法造模,术后3个月两组各随机选取12只检测骨密度验证造模成功。手术组剩余的36只大鼠随机分为双侧卵巢切除模型组(OVX),补肾健脾活血方组(BSJPHX,给药剂量2.979 g·kg~(-1)),阿仑膦酸钠维D3片(Ⅱ)组(ALN,给药剂量1.02 mg·kg~(-1)),假手术组,OVX组给与等体积生理盐水灌胃。12周后处死各组大鼠,双能X射线法检测大鼠全身骨密度,生物力学试验进行胫骨三点弯曲试验,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BMP2,Smad1,Runt相关转录因子2(Runx2),骨保护素(OPG)基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BMP2,p-Smad1,Runx2,OPG蛋白的表达。结果:造模3个月后,与假手术组比较,OVX组大鼠骨密度明显降低,最大载荷及刚度均降低,BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平显著降低(P0.05);给药3个月后,与OVX组比较,BSJPHX组,ALN组骨密度均明显增高,最大载荷及刚度均增加,能显著提高BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平(P0.05)。结论:补肾健脾活血方既能通过调控BMP2/Smad通路的信号转导,又能上调OPG的表达,这可能是补肾健脾活血方防治绝经后骨质疏松症的机制之一。     

基于“脾肾相关”理论探讨TGF-β信号通路与肌肉骨骼的关系

"脾肾相关"理论是中医基础理论之一,在临床中对脾系、肾系、骨科等多种疾病的防治有重要的指导作用。脾主肌肉,脾为后天之本;肾主骨,肾为先天之本,二者在生理上相互资助,病理上相互影响。而转化生长因子-β(TGF-β)信号通路在肌肉骨骼中的作用突出,对肌肉骨骼的生长发育影响显著。从"脾肾相关"理论来探讨TGF-β信号转导通路与肌肉骨骼的关系,突出了中西医结合的理念,为肌肉骨骼疾病的防治提供理论指导,在现代西医学研究上亦有切实意义。     

口服养血方联合蜡疗治疗膝骨关节炎气血虚弱证的疗效观察及作用机制分析

目的:观察口服养血方联合蜡疗治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)气血虚弱证的临床疗效,并探讨其作用机制。方法:2015年1月至2016年12月,采用口服养血方联合蜡疗治疗KOA气血虚弱证患者34例。男16例,女18例。年龄(57. 3±6. 5)岁。病程(21. 3±8. 3)个月。养血方每日早晚各温服250 m L,连续服用1周为1个疗程;蜡疗每日1次,连续治疗7次为1个疗程;每两个疗程之间间隔1 d,均治疗4个疗程。参照《中药新药临床研究指导原则》中骨关节炎的疗效标准评定疗效。抽取患者空腹外周静脉血5 m L,采用酶联免疫吸附法测定血清中可溶性Fas(soluble Fas,s Fas)和可溶性Fas配体(soluble Fas ligand,s Fas L)含量。结果:患者的血清s Fas含量,治疗前(3. 86±1. 12) ng·m L~(-1),治疗1个疗程后(3. 83±1. 09) ng·m L~(-1)、2个疗程后(3. 57±1. 03) ng·m L~(-1)、3个疗程后(3. 27±0. 92) ng·m L~(-1)、4个疗程后(2. 78±0. 83) ng·m L~(-1);血清s Fas L含量,治疗前(0. 91±0. 27) pg·m L~(-1),治疗1个疗程后(0. 86±0. 25) pg·m L~(-1)、2个疗程后(0. 76±0. 23) pg·m L~(-1)、3个疗程后(0. 63±0. 22) pg·m L~(-1)、4个疗程后(0. 32±0. 20) pg·m L~(-1)。治疗4个疗程后按上述疗效标准评定疗效,显效12例、有效15例、无效7例。无效的7例可能与患者不注意起居感受风寒湿邪或没有按时、按量应用药物有关,采用口服独活寄生汤加减(连用3周)联合醋氯芬酸缓释片(连用2周)治疗后症状均缓解。结论:口服养血方联合蜡疗治疗KOA气血虚弱证,可以有效减轻临床症状,其可能通过抑制血清中s Fas及s Fas L的含量达到治疗目的。     

复原活血汤联合凉性经筋通贴膏外敷治疗单纯性肋骨骨折临床观察

目的观察复原活血汤联合凉性经筋通贴膏外敷治疗单纯性肋骨骨折的临床疗效。方法 96例单纯性肋骨骨折患者随机分为复原活血汤组(A组,32例),凉性经筋通贴膏组(B组,32例),复原活血汤+凉性经筋通贴膏组(C组,32例),观察疼痛程度、肿胀指数、总体治疗有效率。结果 3组患者在治疗后第3、7、14天疼痛程度、肿胀指数上有显著下降趋势,差异有统计学意义(P 0. 05),与A组和B组比较,C组降低更明显,差异有统计学意义(P 0. 05); 3组治疗14 d后总体疗效评价,C组患者治疗显效率及总有效率均高于A组和B组,而无效率低于A组和B组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论复原活血汤联合凉性经筋通贴膏外敷在治疗早期单纯性肋骨骨折方面疗效显著,能够明显改善患者胸部疼痛和骨折部位的软组织水肿,提高临床疗效。     

绝经后骨质疏松症相关的LncRNA研究进展

绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是绝经后妇女常见的全身性骨骼疾病。绝经期间卵巢雌激素减少导致骨小梁微结构遭到破坏,皮质骨吸收增加,皮质孔隙增加,这些影响促进了骨质疏松症的发展并增加了脆性骨折风险。现有研究显示长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,LncRNA)在调节成骨细胞分化、破骨细胞分化等方面有重要作用。本文将就绝经后骨质疏松症相关的LncRNA基因展开综述。     

补肾健脾活血方干预骨质疏松模型大鼠骨代谢、氧化应激及自噬的变化

背景:氧化应激被认为是骨质疏松发生的最重要的始动因素之一,氧化应激除直接激活经典的线粒体和内质网凋亡途径外,还激活细胞自噬信号通路,而骨质疏松发病中成骨细胞抗氧化功能的调控机制并未被清晰阐述.目的:探讨补肾健脾活血方改善氧化应激与自噬对骨质疏松大鼠磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的影响.方法:72...     

XCT-790对沉默DKKl、Sost腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响研究

目的 研究ERRα抑制剂（XCT-790)对沉默Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin( Sost)重组腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响。方法 本实验将培养好的MG63细胞分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默（DKK1 + Sost)组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默DKK1组、XCT-790处理沉默Sost组、XCT-790处理沉默（DKK1 + Sost)组,根据组别不同分别用包装好的沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞,应用 Western blot检测MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα蛋白的表达量。结果 （1 )与空白对照组对比,沉默DKK1、Sost、 DKK1 + Sost可以提高OPG、CTGF、FGF2表达量（P <0. 05),降低TNFα表达量（P <0. 05) ;XCT-790干预MG63细胞可降低OPG、CTGF、FGF2 表达量（P <0. 05),增加 TNFα表达量（P<0. 05) ;(2)与沉默 DKK1、Sost、DKKl + Sost 组比较,XCT-790 处理沉默DKKl、Sost、DKKl + Sost组可降低因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而增加OPG、CTGF、FGF2的表达量的作用（P <0. 05 ), 增加因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而降低TNFα的表达量（P <0. 05)。结论 XCT-790可以降低MG63细胞中OPG、CTGF、 FGF2表达量,升高TNF α表达量;还可以调节因沉默DKK1、Sost、DKK1 + Sost而改变的MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2及 TNFα的表达量。     

肩袖损伤患者肌腱和骨组织中氧化应激状态及Beclin1、mTOR的表达分析

目的 观察肩袖损伤发生时肌腱和肩袖止点足印区骨组织中氧化应激反应及Beclin1、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)的差异表达情况。方法 选取20例肩袖损伤患者,男10例,女10例;年龄30～75岁,平均(61.52±7.32)岁。全部患者均行肩关节镜下肩袖锚钉修补术,术中提取患者损伤的肌腱组织和肩袖止点足印区骨组织样本为损伤组,取正常的肌腱组织和足印区旁骨组织样本为对照组。使用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA)法检测肌腱和骨组织样本中的总活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,二氢乙锭(dihydroethidium, DHE)法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)含量;逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriotion-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测肌腱和骨组织中Beclin1、mTOR mRNA的表达...