人子宫内膜异位症在位子宫内膜干细胞的分离和鉴定

目的:从子宫内膜异位症患者在位子宫内膜中分离、培养子宫内膜干细胞,并鉴定其生物学特性,探索一种简便、高效的分离人子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的方法。方法:诊刮获取2012—2014年于天津中医药大学第二附属医院妇产科住院治疗的14例子宫内膜异位症患者的功能层子宫内膜,从中分离出子宫内膜间质细胞,克隆形成法从该细胞中分离出具有强克隆形成能力的克隆形成细胞,对比非克隆形成细胞以噻唑蓝(MTT)比色法测定生长曲线检测两种细胞的增殖能力,连续克隆形成实验检测其克隆形成能力,微球体形成实验检测其微球体形成能力,诱导分化实验检测克隆形成细胞定向分化能力,裸鼠异位病灶形成实验检测其异位病灶形成能力。结果:相较于非克隆形成细胞,生长曲线测定显示克隆形成细胞增殖速度更快,差异有统计学意义(P<0.05)。连续克隆形成实验显示克隆形成细胞5代以内克隆形成率稳定,分别为(12.30±3.75)%、(13.11±3.23)%、(11.86±2.21)%、(12.08±3.01)%、(11.01±3.98)%,非克隆形成细胞随传代次数增加克隆形成率逐渐降低,至第5代已无克隆形成,分别为(5.57±2.13)%、(4.21±2.12)%、(2.23±1.02)%、(0.12±0.07)%、0%,2组细胞对应代数克隆形成率比较差异有统计学意义(P<0.05)。微球体形成实验显示克隆形成细胞3代以内每代成球细胞数量分别为(0.82±0.37)×10~4、(1.45±0.64)×10~4、(3.06±1.73)×10~4,非克隆形成细胞分别为(0.48±0.27)×10~4、(0.37±0.15)×10~4、0,2组对应代数细胞数量比较差异有统计学意义(P<0.05)。诱导分化实验显示克隆形成细胞具有定向分化能力。裸鼠异位病灶形成实验显示克隆形成细胞接种2周后可形成肉眼可见异位病灶,其异位病灶形成率为100%,相较于非克隆形成细胞异位病灶形成率40.62%,差异有统计学意义(χ~2=27.022,P<0.05);克隆形成细胞异位病灶体积为(30.95±12.13)mm^3,对比非克隆形成细胞异位病灶体积(19.12±10.98)mm^3,差异有统计学意义(t=3.065,P<0.05);HE染色显示:克隆形成细胞及非克隆形成细胞均有间质和腺体样异位病灶形成;进一步行免疫组化染色显示异位病灶组织中,间质样细胞Vimentin表达阳性,腺体样细胞CK-19表达阳性。结论:子宫内膜异位症在位子宫内膜功能层中具有强克隆形成能力的子宫内膜干细胞,应用克隆形成法可以有效收集子宫内膜干细胞,经该法收集的子宫内膜干细胞可以冻存及传代培养,且具有干细胞无限增殖、自我更新、定向分化及异位病灶形成能力。     

国医大师段亚亭治疗多囊卵巢综合征相关不孕症经验

多囊卵巢综合征是一种以高雄激素血症、排卵障碍以及多囊卵巢为特征的病变。国内育龄期妇女不孕患者中约20%～30%由PCOS所致,国医大师段亚亭根据多年的临床经验及对PCOS的潜心研究,对多囊卵巢综合征之不孕症这一妇科疑难杂症,从病因病机、治疗用药上形成了自己独有的思路,临床实践中疗效确切,为育龄妇女减轻了疼痛,提高了患者的生活质量。     

穿龙薯蓣皂苷对再生障碍性贫血小鼠Caspase-3Caspase-8蛋白表达的影响

目的：观察穿龙薯蓣皂苷治疗再生障碍性贫血小鼠的疗效及骨髓单个核细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达。方法：选取健康ICR小鼠105只,取15只设为正常对照组,其余90只参照孙氏”0等报道方法建立再障模型,造模成功后将小鼠随机分为6组（①模型组②低剂量组③中剂量组④高剂量组⑤环孢茵素A组⑥雷公藤多苷组）。每组15只。于造模成功后第1-14天,各组分别以相应药物灌胃,每日1次。于第15天,检测小鼠血常规,验证小鼠血象,并提取小鼠骨髓单个核细胞,进行细胞培养,培养24小时后,应用WesternBlot方法测定Caspase-3、Caspase．8蛋白的表达水平。结果：模型组caspase-3表达百分率明显高于其余各组（P〈0．05）;与正常组相比,低、中、高剂量组阳性率稍有增加;雷公藤组高于低、中、高剂量组和CsA组（P〈0．05）,薯蓣皂苷3个剂量组与CsA组之间未见差异。模型组caspase-8表达百分率与其余各组相比显著增加（P〈0．05）,与正常组相比,各组均显著高于正常组（P〈0．05）,薯蓣皂苷3个剂量组之间差异不明显,其中除高剂量组外,其余两组与CsA组、雷公藤组之间差异不明显（P〉0．05）。结论：穿龙薯蓣皂苷可以通过下调Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达,抑制Fas／FasL细胞凋亡信号传导,减少由T淋巴细胞异常活化导致的骨髓细胞凋亡,发挥免疫调节,从而起到对再障的治疗作用。     

韩冰教授活血化瘀药在妇科用药的经验拾零——桃仁、红花与三棱、莪术之别

韩冰教授在妇科疾病治疗中提出活血化瘀法有活血消溶与活血下血之分,在活血化瘀药中桃仁、红花、三棱、莪术4味药,均有活血化瘀止痛之效,均可以用于治疗妇科疾病瘀血证,但是桃仁、红花两味药活血化瘀,以下血为主,两味药为下法。而三棱、莪术两味药在活血化瘀上以消溶为主,可内消瘀结,是为消法。因此临床上应辨证辨病施药,以提高疗效。     

韩冰教授活血化瘀药在妇科用药的经验拾零——桃仁、红花与三棱、莪术之别

韩冰教授在妇科疾病治疗中提出活血化瘀法有活血消溶与活血下血之分,在活血化瘀药中桃仁、红花、三棱、莪术4味药,均有活血化瘀止痛之效,均可以用于治疗妇科疾病瘀血证,但是桃仁、红花两味药活血化瘀,以下血为主,两味药为下法。而三棱、莪术两味药在活血化瘀上以消溶为主,可内消瘀结,是为消法。因此临床上应辨证辨病施药,以提高疗效。     

活血化瘀法对子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的影响

[目的]研究活血化瘀组方姜黄散对子宫内膜干细胞的影响。[方法]噻唑蓝(MTT)法明确姜黄散及孕三烯酮对人子宫内膜干细胞体外干预的最高无毒浓度及作用时效。对比孕三烯酮阳性对照组及不加药阴性对照组评价姜黄散对子宫内膜干细胞克隆形成、微球体形成能力的影响。将子宫内膜干细胞接种于裸鼠皮下形成异位病灶后予药物干预,对比孕三烯酮阳性对照组及不加药阴性对照组观察姜黄散高、中、低剂量组异位病灶体积及异位腺体数量的变化。[结果]姜黄散及孕三烯酮对子宫内膜干细胞干预的最高无毒浓度分别为20 mg/mL及10-6 mol/L,且其抑制作用随时间延长而加强。与阴性对照组比较,姜黄散及孕三烯酮可明显抑制子宫内膜干细胞的克隆形成及微球体形成能力。姜黄散高、中剂量及孕三烯酮可明显抑制裸鼠异位病的生长,异位病灶体积及异位腺体数量较给药前均明显减小。[结论]活血化瘀法具有抑制子宫内膜干细胞增殖的作用。