基于AngⅡ/TRPC6通路探讨当归芍药散对肾病综合征大鼠足细胞的保护机制

目的 探究当归芍药散（DSS）对肾病综合征（NS）大鼠血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和瞬时受体电位阳离子通道6（TRPC6）通路的影响和保护作用。方法 动物实验,160只SD大鼠通过2次尾静脉注射阿霉素（第1周4 mg·kg^-1,第2周2 mg·kg^-1）诱导NS模型,分为模型组（给予生理盐水）,氯沙坦组（30 mg·kg^-1·d^-1）,DSS低、中、高剂量组（4.3,8.6,17.2 g·kg^-1·d^-1）,同时设置正常组。给药4周干预后,透射电镜观察肾脏超微病理改变,试剂盒检测24 h尿蛋白;同时用放射免疫法检测血浆中AngⅡ,钙调神经磷酸酶（CaN）含量的变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾皮质中TRPC6,血管紧张素Ⅱ 1型受体（AT1R）,足细胞裂孔隔膜特异蛋白（Nephrin）,天冬氨酸半胱氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达,免疫组化检测狭缝隔膜中TRPC6,AT1R的表达分布情况。细胞实验,通过AngⅡ刺激MPC5足细胞,随机分为正常组,AngⅡ组,AngⅡ+TRPC6特异性抑制剂SAR7334组,AngⅡ+5%DSS组,AngⅡ+10%DSS组,AngⅡ+15%DSS组,Western blot检测细胞TRPC6,AT1R,Nephrin,Caspase-3蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白含量显著升高（P<0.01）,血浆AngⅡ,CaN含量显著升高（P<0.01）,肾小球结构不完整,足突广泛融合,足突融合率显著增加（P<0.01）,肾皮质中AT1R,TRPC6表达分布增多,肾组织中AT1R,TRPC6,Caspase-3蛋白水平显著增高（P<0.01）,Nephrin蛋白水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,氯沙坦组和DSS高剂量组24 h尿蛋白含量显著降低（P<0.01）,血浆AngⅡ,CaN含量显著降低（P<0.01）,肾小球结构改善,足突融合率显著降低（P<0.01）,TRPC6,AT1R在肾皮质中的表达分布减少,肾组织AT1R,TRPC6,Caspase-3蛋白水平显著降低（P<0.01）,Nephrin蛋白水平显著升高（P<0.01）;同时与正常足细胞比较,AngⅡ刺激后足细胞AT1R,TRPC6,Caspase-3的蛋白表达水平显著增加（P<0.01）,Nephrin表达水平下降（P<0.01）;而与AngⅡ组足细胞比较,SAR7334组足细胞AT1R,TRPC6,Caspase-3蛋白水平显著降低（P<0.01）,Nephrin蛋白水平升高（P<0.01）。结论 DSS可以改善NS病理特征,可能是通过抑制足细胞内AngⅡ与TRPC6的相互作用,进而改善足细胞结构完整性,修复肾小球分子屏障损伤,减缓NS蛋白尿的发展进程。     

肾病综合征大鼠体内钠离子分布研究

目的 探讨阿霉素肾病综合征模型大鼠的潴留钠存储位置及其发生机制。方法 采用两次尾静脉注射阿霉素(第1周4 mg/kg、第2周2 mg/kg)方法建立肾病综合征模型。检测尿液及血液生化指标；干燥法检测大鼠皮肤含水量；原子吸收光谱法检测皮肤钠含量；ELISA法检测糖胺聚糖含量；Western blot检测肾皮质张力反应性增强因子结合蛋白(TonEBP),血管内皮生长因子C(VEGFC),血管内皮生长因子受体3(VEGFR3),淋巴管内皮细胞受体-1(LYVE-1)表达；免疫荧光法检测肾皮质淋巴管分布。结果 模型组大鼠尿蛋白排泄增高(P<0.05或0.01),且肾功能、血脂指标异常，提示模型建立成功。尿Na~+排泄下降(P<0.05或0.01),皮肤钠含量(P<0.01)、糖胺聚糖含量升高(P<0.01),肾皮质TonEBP,VEGFC,VEGFR3,LYVE-1蛋白表达升高(P<0.05或0.01),肾皮质淋巴管密度增加(P<0.01)。结论 肾病综合征大鼠机体发生钠潴留，且潴留的钠存储在皮肤的机制可能与TonEBP/VEGFC/VEGFR3有关。