石蒜碱调控线粒体氧化损伤介导人乳腺癌细胞自噬及凋亡作用机制

目的 研究石蒜碱介导人乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬及凋亡的作用机制。方法 采用CCK-8法检测石蒜碱对MDA-MB-231细胞增殖的影响;倒置显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscopy,LSCM）观察细胞形态;细胞集落实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、线粒体膜电位;LSCM检测线粒体膜通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,MPTP）开放情况;Western blotting检测线粒体自噬相关蛋白［线粒体内膜转位酶（translocase of inner membrane,TIM）、线粒体外膜转位酶（translocase of outer membrane,TOM）、E3泛素连接酶（E3 ubiquitin protein ligase,PARKIN）、PTEN诱导的激酶1（PTEN induced putative kinase 1,PINK1）、微管相关蛋白轻链3（microtubule-associated protein light chain 3,LC3-B）、p62］和凋亡相关蛋白［半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、细胞色素C（cytochrome-C,Cyt-C）］的表达。结果 石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有生长抑制作用,其半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC₅₀）值为6.21 μmol/L;石蒜碱能够改变细胞形态,部分细胞出现凋亡迹象;石蒜碱能够显著抑制细胞的增殖和迁移能力（P＜0.01）;与对照组比较,随着石蒜碱给药浓度的增加,细胞凋亡率随之升高（P＜0.01）,ROS水平升高（P＜0.01）,线粒体膜电位下降（P＜0.01）,MPTP开放（P＜0.01）;石蒜碱给药48 h后,细胞内TIM、TOM、p62和Bcl-2蛋白表达量下调（P＜0.01）,PARKIN、PINK1、LC3-B、Caspase-3、Bax和Cyt-C蛋白表达量上调（P＜0.01）,且呈浓度相关性。结论 石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有生长抑制作用,并可通过调控线粒体氧化损伤介导MDA-MB-231细胞的自噬及凋亡。