北柴胡β-香树脂醇合酶基因家族成员鉴定及功能验证

目的 从转录组层面对北柴胡Bupleurum chinense β-香树脂醇合酶（β-amyrin synthase,β-AS）基因家族成员进行鉴定,并对其表达及功能进行分析验证,以期为解析柴胡皂苷的合成和调控提供基础。方法 基于全长转录组数据挖掘北柴胡β-AS基因家族成员（BcBASs）,利用在线软件对各基因进行生物信息学分析,利用大肠杆菌和烟草验证关键基因的功能。结果 从北柴胡转录组数据中挖掘到不冗余的β-AS基因6个,可分为3个亚家族,它们都具有典型保守区域DCTAE、MWCYCR和QW。进化分析表明,BcBAS1、BcBAS2、BcBAS4、BcBAS5、BcBAS6可能为单功能β-AS基因,BcBAS3可能为多功能β-AS基因,表达分析表明各基因在根和叶中的表达模式有差异。在大肠杆菌中成功表达了BcBAS1可溶性重组蛋白,相对分子质量约87 000,烟草瞬时表达表明BcBAS1编码蛋白具有β-AS功能,能促进β-香树脂醇的积累。结论 对北柴胡中6个不冗余的β-AS基因家族成员进行了鉴定和生物信息学分析,获得了BcBAS1可溶性重组蛋白,在烟草中验证了BcBAS1为有功能的β-AS,为柴胡皂苷合成调控机制和生物合成研究奠定了基础。     

不同干燥方法对附子提取物中双酯型生物碱的影响

目的:了解不同干燥方法对附子提取物中双酯型生物碱的影响,确定适宜的干燥方法。方法:采用高效液相色谱方法,对冷冻干燥、烘箱干燥、真空干燥和喷雾干燥等不同干燥方法所得附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱等3种双酯型生物碱的含量进行测定。结果:不同干燥方法所得附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱的损失率为:冷冻干燥分别为7.14%、5.71%、5.41%;烘干分别为56.43%、31.43%、32.43%;真空干燥分别为29.29%、34.29%、10.81%;喷雾干燥分别为14.29%、11.43%、8.11%。结论:喷雾干燥对附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱3种双酯型生物碱的影响较小,可低成本地进行工业化生产,是附子合适的干燥方法。     

川附子粗多糖提取工艺的研究

目的：研究川附子粗多糖最佳提取工艺。方法：通过单因素试验和L9（3^4）正交试验，研究了料水比、温度、提取时间、pH、提取次数、醇沉浓度对川附子粗多糖提取率的影响。结果：温度和料水比是影响川附子粗多糖提取率的主要因素，最佳提取工艺为料水比1：40，提取温度90℃，时间2h，pH8，提取1次，醇沉浓度80％。在此条件下，测得川附子粗多糖提取率为13．07％，含糖量为9．11％。结论：本工艺为川附子粗多糖的进一步研究奠定了基础。     

附子离体苗中生物碱的测定

目的 检测附子离体培养愈伤组织和离体苗的生物碱量,建立附子乌头类总生物碱和同时测定新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的分析方法。方法 用酸性染料比色法测定乌头类总生物碱的量;反相高效液相色谱法测定新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的量,色谱柱为Zorbax extend-C₁₈(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%乙二胺,梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,检测波长为240 nm,柱温30 ℃。结果 愈伤组织和离体苗中总生物碱的量分别为3.972、2.904 mg/g;新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的量分别为：0.678、0.448、0.887 mg/g,0.464、0.234、0.339 mg/g。3种生物碱得到很好分离,线性关系良好。结论 愈伤组织中生物碱的量高于离体苗,该方法快速简便、灵敏准确、回收率高,可以为附子质量控制提供科学依据。     

植物激素对附子多糖含量的影响

目的 研究植物激素对附子多糖含量的影响.方法 在附子的苗期和子根膨大期喷施不同的激素,采用蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量.结果 不同的激素间差异明显,赤霉素(GA)、α-萘乙酸(NAA)对多糖含量的增加也有作用;6-苄氨基嘌呤(6-BA)和6-糠氨基嘌呤(KT)对多糖含量的增加也有作用;吲哚乙酸(IAA)有抑制影响.结论 植物激素对附子多糖的含量有显著的影响.     

煎煮时间对附子水煎液总生物碱和6种酯型生物碱含量的影响

目的:研究煎煮时间对附子水煎液总生物碱和6种酯型生物碱含量的影响。方法:采用酸碱滴定法测定总生物碱含量;采用HPLC,Agilent ZORBAX Extend-C18分析柱测定6种酯型生物碱含量。结果:随着煎煮时间的延长,不同炮制品中总生物碱的溶出率变化不明显;不同炮制品煎煮过程中酯型生物碱的变化规律不尽相同,其中乌头碱(AC)含量最低,水解最为彻底。结论:临床大剂量应用附子时,最大限度发挥其药理作用,恰如其分地掌握剂量与煎煮时间,是必不可少的。     

乌头简单序列重复区间扩增条件的优化

目的保证乌头ISSR—PCR的稳定性、提高对乌头遗传多样性，亲缘关系分析、种质鉴定的可靠性。方法收集西南地区23个乌头材料，以Mg^2＋，dNTP，引物和聚合酶建立L9（3^4）正交设计，并同时考察模板和甲酰胺浓度及退火温度，建立适宜的ISSR—PCR体系。结果以Mg^2＋2．0mmol／L、dNTP0．25mmol／L、引物0．3μmol／L、rTaq酶1u、模板1．5ng／μl、甲酰胺2％及退火温度（Tm-3）℃的ISSR反应体系最优。结论实验建立的ISSR—PCR体系反应稳定，能用于乌头6^TSSR奔析     

川乌(附子)块根质量与摘心留叶数对附子产量的影响

川乌(附子)是四川道地药材之一,其原植物为毛茛科乌头属植物乌头Aconitum carmichaeliDe-bx[·1-3]。川乌(附子)主产于四川省绵阳地区和陕西汉中地区,其道地性药材最佳产地是四川绵阳地区的江油市[2,4]。川乌(附子)的研究在栽培上包括对生产布局研究[5,6],及主要栽培措施记载[7-9]。江油附子栽培区主要是涪江流域冲击潮土平坝区,其栽培用种则来源于临近的安县、北川、青川等山区的繁殖种,需年年换种,以防病。栽培上还要进行摘心....     

川西北野生九眼独活总香豆素的提取条件优化及含量测定

目的比较不同的样品制备方法 ,建立九眼独活中总香豆素的测定方法 ,并比较川西北不同产地九眼独活中总香豆素的含量。方法采用回流、超声避光浸渍的方法提取总香豆素,以东莨菪素为对照品,用紫外分光光度法,在348nm波长处测定总香豆素的含量。结果不同产地九眼独活总香豆素含量分别为平武0.059%、北川0.074%、青川0.072%、阿坝0.109%、茂县0.061%。结论无水乙醇避光浸渍的提取方法简便,可用于九眼独活中总香豆素的提取。