2009年深圳地区肠道病毒71型毒株VP4基因进化分析

目的 对深圳地区手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)肠道病毒71型分离株(enterovirus 71,EV71)的VP4基因遗传进化进行分析.方法 2009年采集深圳市儿童医院就诊的HFMD患者的粪便标本491份,选取其中8份经细胞培养鉴定为阳性的EV71毒株用RT-PCR扩增VP4基因,利用MEGA4.0软件进行遗传进化分析.结果 2009年深圳地区8株EV71 VP4基因全长207 bp,编码69个氨基酸;8株EV71 VP4基因核苷酸同源性为94.2％ ～98.1％,与深圳2001至2004年分离的17株EV71毒株核苷酸同源性在89.9％ ～98.1％,与GenBank中其他EV71病毒株VP4的核苷酸同源性为79.2％～100％;其中与亚洲流行株阜阳株(EU703812)核苷酸的同源性最高(100％),其次是C4代表株及2004年深圳株(AY895144)为94.2％ ～97.1％.除了印度株和其中1株EV71的VP4编码的氨基酸在第54位(ACA)不同之外,其余7株EV71 VP4编码的氨基酸序列之间以及与GenBank报道的其他序列同源性达100％.8株EV71 VP4基因核苷酸与C4代表株相比有17处不同,除1处以外其余全在简并密码位点上;轻重症病例毒株之间VP4基因序列未见明显改变.进化树显示8株EV71均属于C4基因亚型.结论 2009年深圳市流行的EV71属于C4基因亚型,流行的EV71 VP4基因非常保守,不属于变异区段,绝大部分核苷酸的变异属无义突变,VP4基因编码的氨基酸变异几乎为0.     

诺如病毒深圳株SZ2010422全基因组序列测定及分析

目的 分析GⅡ-4型诺如病毒深圳分离株SZ2010422全基因组序列,了解其分子结构特点及进化特性.方法 根据New Orleans参考株全序列设计引物,用RT-PCR分段扩增诺如病毒全基因组,经分子克隆、测序后进行系统进化分析及衣壳区氨基酸位点分析.结果 GⅡ-4型诺如病毒深圳SZ2010422株病毒基因组全长7559 bp,病毒基因组分三个开放阅读框(ORFs),ORF1、ORF2及ORF3长度分别为5100 bp、1623 bp和807 bp,ORF1与ORF2之间有19个核苷酸重叠.深圳株SZ2010422基因组核苷酸序列与参考株GⅡ-4型New Orleans变异株同源性最高,全长同源性为99.3％,ORFI、ORF2、ORF3同源性分别为99.5％、99.2％和98.6％.根据系统进化分析,深圳SZ2010422株属于GⅡ-4 New Orleans变异株.通过对衣壳区氨基酸比对,New Orleans变异株位点变化情况为:aa310N或K→S,aa341D→N,aa359T→S,aa396H→P,aa460H→Y.结论 诺如病毒深圳株SZ2010422属于GⅡ-4型New Orleans变异株.     

肠道病毒71型真核双基因表达载体的构建

目的通过克隆肠道病毒71型结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体。方法设计合成脑心肌炎病毒(EMCV)IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠埃希菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过重组质粒p-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功。结论成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。     

荧光定量RT—PCR快速检测手足口病病原研究

目的建立荧光定量RT—PCR技术用于检测手足口病的肠道病毒。方法利用TaqMan技术，设计一对共引物及探针，建立、优化反应体系后，构建质粒标准品，利用10倍稀释法建立相对定量标准曲线，根据TCID。倍比稀释，建立灵敏度曲线。特异性检验后利用临床标本与传统的RT—PCR法进行比较。结果定量标准曲线的灵敏度为10^5／μl（R^2=0．999），PCR扩增效率为94％。灵敏度曲线显示检测到的最低浓度值为5．0TCID50／ml（R^2=0．99），PCR扩增效率为97．6％。荧光RT—PCR检出率为80．9％，显著高于RT—PCR（检出率为62．92％）。结论研究建立的荧光定量RT—PCR方法检测肠道病毒敏感性高、特异性好、效率高，可以作为肠道病毒的快速检测方法。     

转基因食品安全性检验的核酸检测技术研究

以国际市场上转基因食品的主流产品转基因大豆及玉米和我国生产的转基因辣椒为材料 ,以PCR方法为基础 ,研究适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术。针对抗除草剂 (孟山都公司 )GM 大豆 ,转Bt 176玉米 (Novartis Ciba Geigy公司 )及转抗菌肽辣椒 (华农 )产品的插入基因及调控序列设计不同引物进行PCR检测。建立了转基因大豆、玉米、辣椒的鉴别和相关标记基因、目的基因检测的技术 ,该方法简便快速 ,检测结果与标准及申报材料相符。     

2007—2009年深圳市外来劳务工乙肝病毒感染情况分析

目的分析2007—2009年深圳市乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA感染情况,为深圳市劳务工群体乙型肝炎的预防和控制提供科学依据。方法利用实时荧光定量PCR法对2007—2009年深圳市1226名乙肝五项异常的外来劳务工进行乙肝DNA检测分析。结果深圳市乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA总阳性率为48.94%。30岁以下乙肝五项异常的外来劳务工乙肝DNA阳性人数占乙肝DNA阳性总数的85.5%。64.73%的20岁以下乙肝五项异常的劳务工为乙肝DNA阳性。不同年龄组劳务工乙肝DNA阳性率差异具有统计学意义（P〈0.001）,而不同年份、不同性别以及不同省份的劳务工的乙肝DNA阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论深圳市乙肝五项异常的劳务工乙肝DNA的阳性率较高,应加强对30岁以下（特别是20岁以下）乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA监测,以便对外来劳务工乙肝病毒感染者的传染性进行正确的评估,为防治方案提供依据。     

ICP-AES和ICP-MS法测定血中微量元素

目的 :调查学生的不明病症的病因。方法 :采用微波消解法处理样品 ,运用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP- AES)和质谱法 (ICP- MS)测定了学生血中微量元素。结果 :与正常学生相比 ,患病学生血中重金属含量差异无显著性 ,而血中钙、铁、钾、镁含量偏低差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :学生的不明病因与营养不良有很大的关系     

深圳地区1999年手足口病患儿中肠道病毒71型的监测

世界上许多国家和地区相继报道了肠道病毒71型(enterovirus type 71, EV71)的流行。目前已知EV71的感染可以导致手足口病, 无菌性脑膜炎、脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病等多种与神经系统相关的疾病。我们于1999年对深圳地区出现手足口病病例进行了EV71的监测, 结果报告如下。     

保龄球馆公共物品的微生物污染及其预防措施的研究

近年来．保龄球运动在我国迅速发展起来，加入保龄球运动的人数不断增加。目前．我国《公共场所卫生管理条例)未将保龄球馆纳入公共场所的管理，对该类场所亦未有相应的卫生标准和卫生要求。为了解保龄球馆的公共物品的卫生状况．并针对该行业的特点，提出可行的消毒措施和卫生管理要求，以防止疾病传染，