脐血移植临床评价和主要问题探讨

自1988年Gluckman报道首例脐血移植（UCBT）成功以来，迄今已有超过6000例儿童和成人患者接受了同胞或无血缘关系UCBT。国内自20世纪90年代初先后在北京、广州、济南、天津等城市建立了脐血库，目前库存脐血总量约3万份，估计全国开展UCBT已超过200例，主要为无血缘关系UCBT。目前UCBT在异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）中的地位尤其在成人移植中的地位还存在争议，UCBT植人率低、造血恢复延迟以及免疫重建缓慢而增加患者感染、早期移植相关死亡为其突出问题。     

血浆巨细胞病毒多聚酶链反应检测用于指导干预性治疗

目的：分析用血浆巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV)多聚酶链反应（plymerase chain reaction,PCR)检测结果指导抗CMV干预性治疗的临床意义。方法：1999年8月至2001年7月行异基因造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)的所有患者自预处理开始，常规用PCR法检测血浆的CMV－DNA（采用华美公司生产的巨细胞病毒4℃ PCR检测试剂盒），每周1次。其中尚无CMV病的临床表现而检测到血浆CMV阳性的患者89例。随机选取52例阳性患者给予干预性治疗。将上述89例患者分为3组（分别为停止治疗时血浆CMV－PCR转阴组、停止治疗时未转阴组、血浆CMV阳性未治疗组）比较各组CMV病的发生率。CMV病的发生率采用Kaplan-Meier曲线表示，曲线间的比较用Log-Rank（曲线无交叉）或Breslow（曲线交叉）检验，某时点率的比较采用RXC列联表或χ^2检验。结果：100d内CMV病的发生率，在治疗后血浆CMV－PCR由阳性转为阴性组为10．26％，治疗结束时血浆CMV－PCR仍为阳性组为66.67%，血浆CMV－PCR阳性未治疗组为36．24％（P＝0.0000)。上述3组中任两组移植后100d CMV病的发生率差异均有显著性。移植后1年时上述3例CMV病累积发生率分别为30.65%、75.00%、42.95%(P=0.0009)，治疗未转阴组与治疗转阴组和阳性未治疗组相比，CMV病的发生率明显升高。结论：血浆CMV－PCR检测结果用来指导干预性治疗有一定临床意义。干预性治疗后血浆CMV－DNA仍未转阴者，应考虑换药或联合用药治疗。     

异基因骨髓移植后供者干细胞输注与供者淋巴细胞输注抗白血病作用的比较

异基因骨髓移植后白血病复发是一个重要的问题,其发生率达10%～36%.在疾病晚期和采用去T细胞移植的患者中复发率可高达70%以上[1],对于此类患者联合化疗效果差,而二次移植则只在晚期复发的患者中效果较好[2,3].一些研究者曾采用供者免疫活性细胞输注或使用人重组白细胞介素2来刺激供者造血或增强移植物抗白血病作用(graft-versus-leukemia,GVL)[4-6].我们报告了20例异基因骨髓移植后复发的白血病患者,对他们分别进行了无粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的供者淋巴细胞(donor-derived lymphocyte,DDL)输注或G-CSF刺激后采集的供者干细胞(peripheral blood progenitor cell,PBPC)输注.     

实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓HB-1的表达

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓细胞HB-1基因的表达水平以及HB-1基因在监测ALL微小残留病(MRD)方面的意义。方法:建立实时荧光定量RT-PCR方法(Taqman探针),检测HB-1基因的表达水平,并对其灵敏度、特异性和重复性进行检测。应用此方法检测了急性淋巴细胞白血病183例次,急性髓系白血病(AML)70例,血液系统非恶性疾病52例和造血干细胞健康供者24例的骨髓细胞HB-1基因的表达水平,并分析33例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者HB-1基因的表达水平与疾病诊断、复发的相关性。结果:构建的实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平,批间变异系数为6.79%,批内变异系数为4.80%。检测到HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞:初发/复发B-ALL中HB-1基因表达的中位水平明显高于ALL完全缓解组、初发T-ALL、初发AML、血液系统非恶性病及健康骨髓供者(33.0%vs 0.68%、0.07%、0.02%、0.58%、0,P0.01),而初发TALL、初发AM L、血液系统非恶性疾病和健康供者HB-1基因的表达水平无统计学差异(P0.05)。B-ALL患者血液学缓解时HB-1基因水平明显下降至0.68%(0-7.99%),疾病复发时HB-1表达水平再次升高(共3例,HB-1分别为7.69%、8.08%和484.0%),其检测结果与流式细胞学检测结果变化一致。结论:HB-1基因特异性表达于B-ALL细胞,所建立的实时荧光定量RT-PCR法在检测骨髓细胞HB-1基因的表达水平方面具有很好的灵敏度、特异性和重复性。HB-1基因可作为B-ALL患者的临床检测、监测MRD和早期预测复发的分子学标志。     

临床病理讨论 第341例——皮肤黏膜出血、胸腔积液、下肢水肿

病历摘要患者男,55岁,教员。因“皮肤黏膜出血3年,胸闷、水肿1年,加重1个月”于2005年4月12日入院。患者3年来无诱因出现皮肤、黏膜淤点及淤斑,首发于双眼睑,渐至头面部、颊黏膜、齿龈、颈、胸、腹及背部。皮损部位容易抓破出血,但能自行压迫止血。一年前胸闷、憋气、活动后加重,夜间不能平卧,伴间断下肢水肿,曾按“结核性胸膜炎,胸腔积液”治疗好转。半年前症状加重,诊为“冠心病、心功能不全,恶性肿瘤性胸腔积液”,给予强心、扩冠、利尿、抗感染、胸腔穿刺抽液10余次,腔内注射丝裂霉素1次,治疗后一度好转。胸水未找到抗酸菌及肿瘤细胞,细…     

真实世界骨淋巴瘤的病理特征、治疗选择与患者预后评估

目的:探讨骨淋巴瘤的临床特点、病理特征、治疗方法和患者预后。方法:回顾性分析北京大学第一医院2004年1月至2018年4月收治的34例骨淋巴瘤患者的临床特征、病理特点、治疗及预后。结果:34例骨淋巴瘤患者的中位年龄为56岁,男、女性别比例为1. 43∶1。原发性骨髓瘤(PBL) 8例,继发性骨髓瘤(SBL) 26例,PBL与SBL之比为0. 31∶1。PBL患者常无明显的全身症状,多因骨痛或病理性骨折起病。病理类型以DLBCL最多,占55. 88%。目前骨淋巴瘤的治疗方法为化疗,或化疗辅以放疗或手术,有条件者行造血干细胞移植治疗。本研究中骨淋巴瘤患者平均生存期为3. 49年,中位生存期为3年,3年生存率为82. 14%。影响生存期的因素有PBL和SBL分类、病理类型、血LDH水平和治疗方法。结论:骨淋巴瘤起病隐匿,选择足量、充分的联合治疗手段可提高患者的生存率,原发性骨淋巴瘤少见且预后较好,继发性骨淋巴瘤预后差。     

血浆炎性趋化因子CXCL9/Mig水平与急性移植物抗宿主病关系的研究

研究血浆炎性趋化因子CXCL9／Mig在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）前后的水平变化，以探讨该因子在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发病中的作用。以35例异基因造血干细胞移植患者为研究对象，其中包括发生0-Ⅰ度aGVHD者13例，Ⅱ度aGVHD者12例，Ⅲ-Ⅳ度aGVHD者10例。采用固相双抗体夹心ELISA方法分别测定造血干细胞移植前、临床aGVHD发生前1周、aGVHD高峰时、aGVHD完全控制后血浆CXCL9／Mig水平。结果表明：中、重度aGVHD（Ⅱ-Ⅳ度）发生时血浆CXCL9／Mig水平明显升高（P〈0．001），且随aGVHD严重程度加重而增加；临床aGVHD表现出现前1周，血浆CXCL9／Mig水平已明显升高（P〈0．001）。血浆CXCL9／Mig水平与巨细胞病毒（CMV）感染等感染并发症无明显相关性（P〉0．05）。结论：CXCL9／Mig血浆水平与aGVHD的发生明显相关，表明该因子在aGVHD发生中发挥重要作用。异基因造血干细胞移植后动态观察血浆CXCL9／Mig水平变化可作为aGVHD早期诊断的有价值的指标，进而达到早期干预aGVHD提高异基因造血干细胞移植效果的目的。     

酪氨酸激酶抑制剂通过下调Mcl-1和Bcl-xl诱导K562细胞凋亡

本研究观察酪氨酸激酶抑制剂STl571对CML细胞增殖和凋亡以及抗凋亡蛋白Mcl—l表达的影响，探讨Mcl一1在BCR／ABL抗凋亡信号传导中的作用。应用STl571处理慢性髓系白血病K562细胞株，采用台盼蓝拒染法和MTT法检测STl571对K562细胞增殖的影响，用AnnexinV和碘化丙锭双染法及流式细胞术检测K562细胞凋亡情况，蛋白印迹法检测STl571对细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达的影响。结果发现：STl57l可有效地抑制K562细胞增殖并诱导K562细胞凋亡，这种作用呈剂量和时间依赖性，同时降低细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和下调抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl-xl的表达。STl571抑制K562细胞增殖和诱导凋亡与抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl—xl的表达下调一致。结论：STl571通过阻断CML细胞内信号传导途径，下调Mcl—l和Bcl—xl的表达，抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，表明Mcl—l和Bcl—xl一起在CML抗凋亡过程中发挥重要作用.     

人鼠嵌合型CD20单克隆抗体增强树突状细胞诱导抗淋巴瘤CTL免疫效应研究

本研究利用人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤的靶向作用特点和其人源Fc段结合人树突状细胞（DC）的特点，探讨抗CD20单克隆抗体激发人DC呈递肿瘤抗原从而诱导抗淋巴瘤的细胞免疫效应。用人体外周血单个核细胞（MNC）体外诱导Dc生成。对高表达CD20的人淋巴瘤细胞株（Raji）分别进行抗CD20单克隆抗体单独作用（R组）、加热诱导凋亡（A组）、诱导凋亡同时加用抗CD20单克隆抗体作用（R＋A组）。经上述处理的肿瘤抗原分别负载于DC，应用透射电子显微镜观察DC对肿瘤抗原的吞噬作用，用抗原处理的DC进行自体混合淋巴细胞反应，应用ELISPOT分析效应细胞一干扰素产生和用MTT法分析效应细胞对Raji靶细胞的杀伤作用。结果表明：R组处理的DC无明显吞噬现象，A组中易见DC吞噬凋亡小体，而R＋A组中DC吞噬较多的细胞碎片。流式细胞术检测显示，3个实验组DC上的CD80、CD86、HLA．DR表达高于对照组，差别显著（P〈0．05），其中R＋A组的CD86表达阳性率明显大于R组和A组（P〈0．05）。淋巴细胞表面抗原检测结果显示，所有实验组CD8^＋细胞的比例均明显高于对照组（P〈0．05），且应用抗CD20单克隆抗体的实验组（R组和R＋A组）CD56^＋细胞数均有所增加，与不用抗CD20单克隆抗体组比较差别显著（P〈0．05）。ELISPOT方法证明，各实验组产生γ-干扰素的细胞数均高于对照组，且当效靶比为1：10时，R＋A组斑点数明显高于其它组（P〈0．05）。MTT法测定杀伤实验结果表明，各实验组对Raji细胞的杀伤率均较对照组增加，其中R＋A组的杀伤率高于R组和A组，具有显著统计学差异（P〈0．05）。结论：抗CD20单克隆抗体能够介导DC产生抗淋巴瘤效应，即激活并扩增肿瘤特异性细胞毒性淋巴细胞（CTL）和自然杀伤细胞（NK），抗CD20单克隆抗体同时加凋亡诱导处理肿瘤细胞作为抗原冲击树突状细胞，能进一步增强抗淋巴瘤的细胞免疫效应。     

个体相关变量对中国健康人群常规凝血参数的影响

目的:本研究旨在建立中国健康人群年龄和性别相关的常规凝血试验参考范围,并评估吸烟、血糖和血压等个体相关因素对其影响。方法:回顾性统计分析2004年5月至2007年10月北京大学深圳医院成人择期非感染小手术患者术前的凝血功能检查资料。结果:1729例患者符合入选标准而被纳入研究,其中,男1104例,女625例。常规凝血参数呈一定程度的年龄和性别依赖。随着年龄增长,纤维蛋白原(Fib)水平逐渐增高,女性显著高于男性;活化部分凝血活酶时间(APTT)逐渐缩短,50岁以上女性APTT显著短于男性;凝血酶原时间(PT)和国际标准化比率(INR)呈现逐渐缩短/降低趋势,但60岁以上有延长趋势。女性TT长于男性。男性吸烟者和非吸烟者比较,INR、APTT和凝血酶时间(TT)显著降低/缩短,Fib显著增高。血压与APTT、TT弱负相关,与Fib弱相关。空腹血糖(FBG)与PT、INR、APTT以及TT弱负相关,与Fib弱相关。逐步多元线性回归分析显示,FBG、年龄、吸烟与中国正常成人APTT值独立负相关。结论:随着年龄增长,血液凝固潜能越来越强,可部分解释随着老化进程动脉和静脉血栓形成发病率呈指数级增加。吸烟、正常范围内的较高FBG水平为促凝因素。本研究建立了大样本中国人年龄和性别相关的常规凝血参数参考范围,可为以后进行年龄跨度较大的相关研究、临床诊断和治疗提供参考。