体质量对大鼠胰岛分离纯化产量的影响

脊髓损伤是脊柱外科中严重的损伤,通过细胞移植方式来修复脊髓损伤是一种行之有效的方法,目前国内外对脊髓损伤修复的研究主要集中在细胞移植上,如许旺细胞移植、干细胞移植、嗅鞘细胞移植及骨髓间充质干细胞移植等。这些细胞的移植在不同程度上促进了轴突髓鞘的再生,细胞的移植也从单一细胞移植发展到多种细胞联合移植,联合移植较单一细胞移植有更好的效果。另外,一些影响细胞正常生长的因素,如环境和分子反应过程也有可能为细胞移植修复脊髓损伤提供有益启示。     

高浓度芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛葡萄糖刺激胰岛素分泌

目的研究高浓度芬太尼对大鼠胰岛的损伤作用。方法通过用胶原酶V液灌注分离成年SD大鼠胰岛,不连续密度梯度离心法纯化胰岛。然后将胰岛分为空白对照组和处理组,处理组与20ng／ml的芬太尼在静态条件下共同培养24h和后,检测低高浓度葡萄糖（2．8和16．7mmol／L）刺激胰岛素释放试验,细胞内cAMP及蛋白含量,电子显微镜检测胰岛细胞。结果高浓度的芬太尼明显抑制大鼠胰岛的葡萄糖刺激胰岛素释放量,及细胞内cAMP的含量,电子显微镜检测显示高浓度芬太尼对大鼠胰岛具有损伤作用。结论高浓度芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛素的分泌,并且对鼠胰岛细胞具有一定的损伤作用。     

体质量对大鼠胰岛分离纯化产量的影响

背景:由于实验条件对胰岛的产量影响较大,因此需要在动物种属、动物周龄、体质量以及胶原酶的浓度、胰腺消化时间等方面进行优化组合,筛选出最佳条件,以期得到高产量的胰岛.目的:观察体质量因素对大鼠胰岛分离纯化产量的影响,筛选出获取高产量胰岛素的最佳体质量.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-01/12在上海市东方医院细胞治疗室及中心实验室等相关单位完成.材料:60只雄性SD大鼠按照体质量随机分为100～150 g组、150～200 g组、200～250 g组、250～300 g组、300 g以上组,每组12只.方法:通过胆总管灌注胶原酶V来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛.主要观察指标:以双硫腙染色鉴定胰岛,丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率,根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量,葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能.结果:分离的大鼠胰岛具有较好的质量,胰岛纯度为95%左右,活率为90%左右,体外培养中生长良好.随着体质量增加,胰岛数量和胰岛当量明显增加(P＜0.05),具有明显的相关性(r=0.918,r=0.922,P＜0.01),并且最大直径的胰岛数量也在增加(P＜0.05),以300 g以上组所获得的胰岛数量及胰岛当量最多(P＜0.05).在低糖和高糖刺激下胰岛素释放分别为(62.33±9.67)mU/L和(125.5±22.04)mU/L,差异具有显著性意义(P＜0.05),刺激指数为2.01±0.21,提示胰岛细胞功能良好.结论:大鼠体质量是获得高产量胰岛的关键性因素之一,在其他条件不变的情况下,体质量高的大鼠所获得的胰岛产量较高.实验选择300 g以上的大鼠进行胰岛分离纯化可获得稳定的高产量胰岛.     

八宝丹抑制TNF-α诱导C2C12成肌细胞Atrogin-1表达的研究

目的 研究八宝丹（BBD）对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的C2C12成肌细胞中核因子κB(NF-κB)通路及下游通路UPS系统中萎缩相关基因1(Atrogin-1)的作用。方法(1)筛选BBD干预浓度实验：取对数生长期C2C12成肌细胞分别予0、0.125、0.25、0.5、0.75、1 mg/mL不同浓度BBD干预48 h,采用MTT法检测细胞活力;(2)筛选TNF-α刺激细胞的浓度和时间实验：取对数生长期C2C12成肌细胞,分别予0、1、10、50 ng/mL TNF-α蛋白液刺激C2C12成肌细胞,Western blot法检测p-P65、Atrogin-1蛋白表达以筛选出TNF-α刺激细胞的最佳浓度;再根据TNF-α刺激细胞的最佳浓度干预C2C12成肌细胞0 min、8 min、15 min、30 min、1 h、4 h,Western blot法检测p-P65、Atrogin-1蛋白筛选出TNF-α刺激细胞的最佳时间;(3)BBD干预实验：将C2C12成肌细胞随机分为空白对照组、药物对照组、模型组、八宝丹组,药物对照组和八宝丹组分别加入BBD预处理2 h,再根据筛选的T...     

苍艾挥发油经豚鼠外耳道给药的安全性评价

目的 考察苍艾挥发油经外耳道给药的急性毒性、皮肤过敏性及外耳道皮肤刺激性反应，以评价该挥发油水溶剂的临床前安全性。方法 ①外耳道急性毒性实验：分别采用豚鼠完整皮肤和破损皮肤模型，按苍艾挥发油水溶剂15%浓度给药，1 d内4次耳道内给药后连续观察7 d；②皮肤过敏性实验：分别采用豚鼠完整皮肤和破损皮肤模型，连续7 d涂抹不同浓度(1%、5%、15%)苍艾挥发油水溶剂，以聚山梨酯80水溶液作为阴性对照，进行过敏性考察；③外耳道皮肤刺激性试验：分别采用豚鼠完整皮肤和破损皮肤模型，连续7 d将不同浓度(1%、5%、15%)苍艾挥发油水溶液浸湿的棉球，以聚山梨酯80作为阴性对照，分别放置耳道内，6 h后取出，连续给药7 d，进行外耳道皮肤刺激性考察。结果 ①外耳道急性毒性实验中，所有豚鼠外耳道及鼓膜、体质量无明显变化，未见明显全身毒性反应；②苍艾挥发油水溶剂及聚山梨酯80在所有豚鼠中未出现红斑、水肿等情况，评价为无致敏性；③外耳道皮肤完整组和破损组，均未出现红斑、水肿以及鼓膜变化反应，评价为无刺激性。结论 15%以内的苍艾挥发油对豚鼠外耳道及鼓膜安全无刺激性、无致敏性，是一种安全性较高的外用中成药，可用于临床上外耳道治疗的局部应用。     

绿茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯对高脂高糖饮食诱导肥胖小鼠伤口愈合的影响

目的 评估绿茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）全身性给药对高脂高糖饮食（HFFD）诱导的肥胖小鼠伤口愈合障碍的干预效果。方法 7～8周龄雄性C57BL/6J小鼠经60 kcal%高脂饲料和20%果糖水持续饲养10周后成为肥胖小鼠，周龄及相关条件具有可比性的正常饮食组小鼠为对照。在小鼠尾部进行全层切除伤口造模后，每天腹腔注射EGCG进行干预，连续给药21天。在第0、3、7、14、21天时测量小鼠体重，并对伤口部位进行拍照记录。干预完成后，采用苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠伤口新生皮肤组织形态学；蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测小鼠皮肤组织中DNA双链断裂（DSB）特异性生物标志物磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)的表达水平。结果 与正常饮食组小鼠比较，HFFD肥胖小鼠体重增重>30%(P<0.01)，皮肤组织中γ-H2AX表达上调（P<0.05）,14天时，模型组伤口面积为正常饮食组的1.97倍；21天时，模型组伤口面积为正常饮食组的4.49倍，差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。正常饮食小鼠伤口部位新生皮肤可以重新...