外界条件的改变对红花离体培养的影响

目的 研究外界培养条件的变化对红花离体培养过程中不同发育阶段培养物的影响.方法 以红花种子诱导的无菌苗子叶为外植体,分别接种至含有不同碳氮源、不同PH值、不同温度、不同湿度和不同光照的培养基中,观察其生长情况.结果 通过实验筛选出蔗糖浓度为3%,KNO_3浓度为MS培养基中KNO_3浓度的2倍,最佳pH为6.2,红花离体培养体系在24℃,30%的相对湿度,16 h光照,8 h黑暗交替培养的条件下,最利于红花的分化.结论 3%的蔗糖作为碳源,最适合愈伤组织的生长;2倍于MS培养基中的KNO_3含量有利于愈伤组织的生长和不定芽的分化;pH值为6.2时,最适宜红花不同阶段培养物的生长;24℃为红花离体培养的最适温度,生根时的温度为21℃较好;湿度为50%时,适于愈伤组织鲜重积累,30%的湿度适于不定芽分化和生根;黑暗培养利于鲜重积累,16 h光照,8 h黑暗交替培养有利于不定芽的分化,8 h光照,16 h黑暗交替培养有利于生根.     

红花遗传转化受体系统的建立及转酸性成纤维细胞生长因子aFGF的初步研究

目的:将aFGF与红花的油体蛋白融合,转入红花中,直接通过提取红花油来实现红花与aFGF的双重功效.方法:以不同日龄的红花子叶为外植体,采取正交试验设计的方法,摸索出红花再生体系的最佳条件.然后通过农杆菌介导法将aFGF基因转入到红花中,对不同浓度的抗生素进行筛选,进行PcR鉴定,计算阳性率.结果:根据不同的激素配比,确定了红花分化的最佳培养摹为MS+BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1);生根的最适培养基为1/4 MS+N从2.0 mg·L~(-1)+IAA 0.5 mg·L~(-1).3种不同种类和浓度的抑菌抗生素对红花浸染后的抑菌效果略有不同,结合抑菌效果,污染率,芽的分化率以及成本问题等因素的综合考虑,抑菌抗生素选择用Tim,质量浓度为400 mg·L~(-1)即可抑制细菌的生长,同时有利于芽的分化;hyg的筛选压力则选择6 mg·L~(-1)为它的临界浓度;对8棵转化植株进行鉴定,阳性率为25%.结论:通过器官发生途径,确定出红花分化与生根的最佳激素组合与配比,建立了红花的再生体系;确定出最适的抑菌抗生素与筛选抗生素的浓度;经过筛选获得的再生植株,通过PCR检测,部分扩增出aFGF目的基因,证实了aFGF基因整合到红花基因组中.这为红花作为植物生物反应器的研究奠定了扎实的基础.