基于转录组测序初步揭示天麻生长代谢的分子机制

目的以箭麻(天麻Gastrodia elata的一个生长阶段)和共生天麻(白麻与蜜环菌共生的天麻)为实验材料,通过转录组测序分析初步揭示箭麻和共生天麻生长代谢特征。方法采用Trizol Reagent(Invitrogen)提取天麻样品中的RNA,建立测序文库并利用Illumina Hiseq^TM2000进行测序,通过与基因数据库比对分析注释和发现差异表达基因。结果箭麻与共生天麻间共获得72244条序列,其中有26312条得到注释。在False Discovery Rate(FDR)<0.05和|log2FC|>1筛选条件下,共有12498条基因发生显著差异表达,其中9000条基因表达上调,3498条表达下调。京都基因和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)功能富集分析表明,差异基因显著富集在20个代谢途径中,其中包含氮代谢,碳代谢和能量代谢等途径。差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)注释到蛋白相邻类的聚簇(cluster of Orthologous Groupsof proteins,KOG)的25个分类中,其中差异表达基因与生长代谢过程相关过程能量的产生和转化(energy production and conversion,C)、碳水化合物转运与代谢(carbohydrate transport and metabolism,G)、次生代谢产物的合成、转运和代谢(secondary metabolites biosynthesis,transport and metabolism,Q)类别获得2218个注释结果。基于转录组数据,分析了生长代谢过程中相关基因差异表达水平,发现有利于碳、氮、能量等物质积累的谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、天冬酰胺合成酶(asparagine synthetase,ASNS)、蔗糖合成酶(sucrose synthase,Su Sy)、可溶性淀粉合成酶(soluble starch synthase,SSS)、ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGPase)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)、己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸脱氢酶(pyruvatedehydrogenase,PDH),苹果酸脱氢酶(malatedehydrogenase,MDH),异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)基因呈上调表达,除分解ATP的ATP酶(adenosine-triphosphatase,ATPase)上调外,分解氮、碳物质的谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)、精氨酸酶(arginase,Argase)和淀粉酶(amylase,AMS)基因呈下调表达。q RT-PCR分析结果表明这些基因表达水平与转录组表达情况基本一致。相比较于箭麻,共生天麻生长代谢中物质积累比较旺盛。结论共生天麻通过消解侵入的蜜环菌合成有机营养物质和能量,有利于其从蜜环菌和周围环境吸收营养物质供箭麻生长需要,为进一步研究天麻不同发育阶段代谢特征奠定基础,并为天麻栽培提供理论指导。     

HPLC测定不同产地天麻中巴利森苷C的含量

目的:建立高效液相色谱法测定天麻中巴利森苷C的含量。方法:色谱柱为Agilent Eclipse XDBC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(22∶78),检测波长为220 nm,柱温为25℃,流速为1.0 ml/min。结果:巴利森苷C在0.276~4.426μg范围内线性关系良好(r=0.9995);平均加样回收率为99.72%,RSD为1.15%(n=6)。不同产地天麻中巴利森苷C的含量相差较大。结论:该方法简便快速,准确可靠,可为天麻药材质量标准提供新依据。     

不同炮制方法对天麻素及天麻苷元含量的影响

目的考察不同炮制方法对天麻中天麻素、天麻苷元含量的影响，从而得到天麻最佳炮制方法。方法分别对天麻鲜切片进行微波加热、直接晒干、常压蒸煮、冷冻干燥、热风干燥处理后，采用HPLC法，MD-ODSC18柱（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱测定天麻中天麻素和天麻苷元的含量。结果天麻切片微波处理30s后，天麻素含量最高，天麻素和天麻苷元含量总量最高。结论综合天麻素和天麻苷元两个指标，以及处理后天麻的外观形态，微波处理30s这种炮制方法为最佳，但考虑到生产中的实际条件，水蒸5min可为生产提供参考依据。