miR⁃203a⁃3p通过靶向LASP1介导Akt/GSK⁃3β/Snail信号通路调控肝癌细胞生物学行为

目的 研究miR?203a?3p对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞生物学行为的影响及其相关分子机制。方法 将miR?203a?3p 模拟物（miR?203a?3p mimics）及阴性对照（miR?NC mimics）、LIM和SH3蛋白1（LIM and SH3 protein 1,LASP1）过表达质粒（pcDNA?LASP1）及阴性对照质粒（pcDNA?NC）分别转染至HepG2细胞。以qRT?PCR法检测细胞miR?203a?3p、LASP1 mRNA表达情况,CCK?8法和异体移植瘤实验分析细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin V?FITC/PI法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测miR?203a?3p与LASP1的靶向关系,Western blot法检测细胞中LASP1、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、磷酸化Akt（phosphorylated Akt,p?Akt）、糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase?3β,GSK?3β）、磷酸化GSK?3β（phosphorylated GSK?3β,p?GSK?3β）、Snail表达情况。结果 与miR?NC组相比,miR?203a?3p组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、LASP1 mRNA和蛋白表达量、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著降低,小鼠移植瘤体积和质量显著减少,细胞凋亡率显著升高（均P<0.01）。Targetscan软件预测显示,miR?203a?3p与LASP1 存在靶向关系;与LASP1?Wt+miR?NC组比较,LASP1?Wt+miR?203a?3p组相对荧光素酶活性显著下降（P<0.001）。与miR?203a?3p+pcDNA?NC组比较,miR?203a?3p+LASP1组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著升高,小鼠移植瘤体积和质量显著增加,细胞凋亡率显著降低（均P<0.01）。结论 miR?203a?3p可能通过靶向抑制LASP1表达调控Akt/GSK?3β/Snail信号通路活性,从而调控HCC细胞生物学行为。     

金黄膏外敷预防输注表阿霉素药物性静脉炎临床观察

目的：探讨金黄膏外敷预防输注表阿霉素静脉炎的疗效。方法：将224例患者随机分为观察组和对照组各112例。观察组在输液前15min将金黄膏沿静脉走向均匀涂擦于输液穿刺点上方的皮肤上;对照组不涂药,观察输液后静脉炎的发生率及轻重程度。结果：观察组静脉炎的发生率为17.86%（20例）,且未发生Ⅱ、Ⅲ级静脉炎。对照组静脉炎的发生率为68.75%（77例）,其中Ⅱ级25.89%,Ⅲ级14.29%。结论：金黄膏外敷能明显降低表阿霉素输注致静脉炎的发生率。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

核仁小RNA宿主基因16和微RNA-205-5p在肝癌患者对奥沙利铂耐药中的作用及机制研究

目的探讨长链非编码(long non-coding,lnc)RNA核仁小RNA宿主基因16(small nucleolar RNA host gene 16,SNHG16)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、凋亡及对奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药的影响和作用机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应检测HepG2、HL7702细胞及肝癌耐药细胞(HepG2/OXA)中lncRNA SNHG16和微RNA(micro RNA,miR)-205-5p表达;MTT法、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;在线数据库预测lncRNA SNHG16的靶基因,双荧光素酶报告试验验证两者结合关系;蛋白质印迹法检测多药耐药蛋白(multidrug resistance protein,MRP)1、细胞周期素D1和裂解的半胱氨酸蛋白酶3及Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果 HepG2/OXA细胞中lncRNA SNHG16表达较HepG2和HL7702细胞显著升...