断藤益母汤对破骨细胞活性及Wnt信号通路的影响研究

目的:探讨断藤益母汤(DTYMT)对破骨细胞活性及Wnt信号通路的影响。方法:通过诱导RAW264. 7巨噬细胞建立体外破骨细胞培养体系;设空白组、模型组、断藤益母汤400、600、800、1000μg/m L浓度组、甲氨蝶呤2μg/m L组,然后通过CCK-8法检测细胞生存率,蛋白免疫印迹法检测Wnt信号通路关键蛋白表达。结果:TRAP染色试验显示,与模型组相比,DTYMT 800、1000μg/m L浓度组融合细胞数目显著减少,具有统计学意义(P 0. 01)。CCK-8结果显示,与模型组比较,DTYMD 600、800、1000μg/m L浓度组和甲氨蝶呤2μg/m L组生存率明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。免疫蛋白印迹结果显示,与模型组相比,DTYMT 800、1000μg/m L、甲氨蝶呤2μg/m L组中Wnt3a、β-catenin蛋白表达量显著上升(P 0. 05,P 0. 01),DKK1蛋白表达水平显著下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:断藤益母汤可能是通过影响Wnt信号通路,即上调Wnt3a、β-catenin蛋白表达、下调DDK1蛋白表达以及抑制破骨细胞的分化和增殖而起到减缓RA的骨破坏作用。     

断藤益母汤对破骨细胞RANKL信号通路及MMP-9的影响

目的:探讨断藤益母汤(DTYMD)对破骨细胞(OC)核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)信号通路及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响及其骨保护的作用机制。方法:通过诱导RAW264.7巨噬细胞建立体外破骨细胞培养体系;设空白组,模型组,DTYMD(400,600,800,1 000 mg·L~(-1))组和甲氨蝶呤(2 mg·L~(-1))组,然后通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对破骨细胞进行鉴定;细胞增殖检测(CCK-8)各组细胞生存率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RANKL信号通路关键蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞MMP-9表达水平的变化。结果:TRAP染色显示,与模型组相比,DTYMD 400,600 mg·L~(-1)组融合细胞数量有所减少,但差异无统计学差异;DTYMD 800,1 000 mg·L~(-1)组融合细胞数目显著减少(P0.01)。CCK-8结果显示,与模型组比较,DTYMD 600,800,1 000 mg·L~(-1)组和甲氨蝶呤2 mg·L~(-1)组生存率明显下降(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,与模型组相比,DTYMD 1 000 mg·L~(-1)组、甲氨蝶呤2 mg·L~(-1)组中RANKL蛋白表达有所下降(P0.05)。DTYMD各组中的OPG蛋白表达水平无明显变化。ELISA结果显示,与模型组相比,DTYMD各组及甲氨蝶呤组中的MMP-9表达水平均有所下降,且DTYMD质量浓度越高,下降越明显(P0.05,P0.01)。结论:断藤益母汤可能是通过下调RANKL和MMP-9的表达以及抑制破骨细胞的分化和增殖而起到骨保护作用。