小檗碱对胰岛素抵抗模型小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α/骨骼肌葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的观察小檗碱对胰岛素抵抗模型小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)和骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的作用机制。方法建立胰岛素抵抗小鼠模型,进行小檗碱灌胃,检测血糖、胰岛素及胰岛素敏感性;RT-PCR检测骨骼肌GLUT4及PGC-1αm RNA表达水平。结果小檗碱能够显著降低血糖,提高胰岛素敏感性,促进骨骼肌GLUT4及PGC-1α表达。结论小檗碱能够通过增加PGC-1α表达,促进GLUT4表达,改善胰岛素抵抗。     

补肾通络方改善骨质疏松大鼠糖代谢的作用及机制

目的:探讨补肾通络方对去卵巢骨质疏松大鼠脂肪、骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的干预效应及对糖代谢的作用机制。方法:将雌性大鼠随机分为假手术组和手术组,分别为22只和60只,全部进行卵巢切除造模。术后70 d从2组分别随机选出10只大鼠处死后取右侧股骨,采用双能X射线骨密度仪进行检测。确认造模成功后,假手术组剩12只,手术组剩48只,手术组大鼠随机分为4组,分别为模型组、补肾方组、通络方组、补肾通络方组,每组12只。各给药组分别给予补肾方(5.4 g·kg~(-1)),通络方(0.9 g·kg~(-1)),补肾通络方(6.3 g·kg~(-1))进行灌胃,连续70 d。实验结束后,检测血糖和骨密度。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脂肪、骨骼肌PGC-1α和GLUT4 mRNA和蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组血糖略升高,骨密度显著下降(P0.01),脂肪、骨骼肌PGC-1α和GLUT4表达显著下降(P0.01)。与模型组比较,补肾通络方组大鼠血糖明显下降,脂肪、骨骼肌PGC-1α和GLUT4 mRNA和蛋白表达均明显增加(P0.05,P0.01)。结论:补肾通络方通过促进脂肪及骨骼肌PGC-1α表达,增加GLUT4表达,提高糖代谢水平。     

二至丸干预去卵巢骨质疏松大鼠骨重建的效应及机制

目的?明确二至丸对去卵巢骨质疏松大鼠骨重建的干预作用,并探究其作用机制。方法?采用卵巢切除术制备绝经后骨质疏松症动物模型,确认造模成功后,将60只模型大鼠随机分为模型组、阿仑磷酸钠组、氟化钠组、二至丸组、女贞子组、墨旱莲组等6组,另设假手术组10只。各组分别予:生理盐水（5?mL/kg）、阿仑磷酸钠（1?mg/kg）、氟化钠（5?mg/kg）、二至丸（2?g/kg）、女贞子（1?g/kg）、墨旱莲（1?g/kg）灌胃,1次/日,连续8周,假手术组给药与模型组相同。采用Micro-CT扫描大鼠股骨;双能Ｘ线吸收法测定模型股骨颈部位的骨密度（BMD）;椎体压缩法检测骨最大载荷量;ELISA法检测血清骨碱性磷酸酶（BALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、β链蛋白（β-catenin）及趋化素（chemerin）;qPCR检测骨组织RANKL、OPG、β-catenin及chemerin基因表达。结果?二至丸、女贞子和墨旱莲可显著增加骨量,提升骨最大载荷量,并修复骨微结构。血清中,二至丸、女贞子和墨旱莲可明显降低TRACP-5b、RANKL、chemerin表达水平,并提升BALP、OPG、β-catenin表达水平。骨组织中,二至丸、女贞子和墨旱莲组明显抑制RANKL、chemerin mRNA表达,并促进OPG、β-catenin mRNA表达增加。结论?二至丸可有效改善去卵巢骨质疏松大鼠的骨代谢异常,其作用机制与调控chemerin密切相关。      

补肾通络方通过抑制chemerin及炎性因子干预骨质疏松症的机制研究

目的评价补肾通络方对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨、成脂分化以及小鼠单核巨噬细胞RAW264.7破骨分化模型的干预作用,并探究其调节骨形成及骨吸收的相关机制。方法分别给予补肾方、通络方和补肾通络方进行干预,采用茜素红染色法鉴定BMSCs成骨分化后各组钙结节形成情况;采用油红O染色鉴定BMSCs成脂分化后各组脂滴形成情况;采用q RT-PCR法检测BMSCs成骨、成脂分化后各组成骨、成脂分化标志基因m RNA表达,成骨、成脂分化过程和炎症模型中chemerinm RNA表达;采用ELISA法检测BMSCs成骨、成脂分化过程和炎症模型中各组chemerin分泌量。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant alkaline phosphatase,TRAP)染色鉴定各组RAW264.7细胞破骨分化程度,并测定各组TRAP活性;采用Westernblotting法检测RAW264.7细胞破骨分化中各组TRAP蛋白表达情况;采用q RT-PCR法及ELISA法检测RAW264.7细胞破骨分化后各组chemerin、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)mRNA表达及分泌。结果与对照组比较,补肾通络方组钙结节显著增多(P0.01),脂滴显著减少(P0.01),成骨分化标志基因表达显著升高(P0.01),成脂分化标志基因表达显著下降(P0.05),chemerin分泌及基因表达在成骨分化第3天及成脂分化第3、7天显著下降(P0.05、0.01)。与对照组比较,BMSCs炎症模型chemerin分泌及基因表达显著升高(P0.01);与BMSCs炎症模型比较,补肾通络方组chemerin分泌及基因表达显著下降(P0.01)。与对照组比较,RAW264.7细胞破骨分化中TRAP阳性细胞、活力、蛋白表达以及IL-6、TNF-α分泌与基因表达均显著升高(P0.05、0.01);与模型组比较,补肾通络方组TRAP阳性细胞、活力、蛋白表达以及IL-6、TNF-α分泌与基因表达显著降低(P0.01)。结论补肾通络方可通过抑制chemerin及炎症因子来调节成骨、成脂分化及破骨细胞分化,从而促进骨形成、抑制骨吸收、改善骨质疏松症。     

二至丸对绝经后骨质疏松模型大鼠脂肪组织糖代谢影响

  目的  探讨二至丸对绝经后骨质疏松症大鼠脂肪组织糖代谢的影响。  方法  通过切除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症大鼠模型, 大鼠随机分为: 模型组、阿仑膦酸钠组、氟化钠组和二至丸组, 每组8只。另设假手术组8只。分别予生理盐水(5 mL·kg-1),阿仑膦酸钠(1 mg·kg-1),氟化钠(5 mg·kg-1),二至丸(1.6 g·kg-1)灌胃8周, 每日1次, 假手术组干预同模型组。采用ELISA法检测血清胰岛素,qPCR、Western blot法检测脂肪组织Glut4、PGC-1α、Sirt1 mRNA及蛋白表达。  结果  与假手术组相比, 模型组大鼠血清胰岛素明显增加(P < 0.05), 脂肪组织Glut4、PGC-1α及Sirt1 mRNA和蛋白表达水平显著减少(P < 0.01)。与模型组相比, 二至丸组血清胰岛素明显减少, 脂肪组织Glut4、PGC-1α及Sirt1 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P < 0.01)。  结论  二至丸能够激活Sirt1/PGC-1α/Glut4通路,改善绝经后骨质疏松症状态下脂肪组织糖代谢紊乱。      

补肾通络方对骨质疏松斑马鱼效应评价及破骨细胞自噬机制

目的:评价补肾通络方对斑马鱼骨质疏松模型的干预效应,并明确其对破骨细胞分化的自噬调控机制。方法:选取新生3 d健康斑马鱼幼鱼260尾,25 mmol·L~(-1)泼尼松龙(Pred)干预3 d,通过钙黄绿素染色确认建模成功,分为空白组,Pred组(25 mmol·L~(-1)),依替磷酸二钠组(300 mg·L~(-1)),补肾组(180 mg·L~(-1)),通络组(30 mg·L~(-1))和补肾通络组(210 mg·L~(-1))各40尾。药物干预4 d后采用钙黄绿素染色后拍照,统计斑马鱼脊椎骨荧光面积;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测斑马鱼碱性磷酸酶(ALP),骨形态发生蛋白-2b(BMP-2b),Runt相关转录因子2(Runx2),组织蛋白酶K(CTSK),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及活化T细胞核因子(NFATC-1)mRNA表达。培养RAW264.7细胞至80%～90%密度后分为空白组,Rankl诱导组(10μg·L~(-1)),补肾组(180 mg·L~(-1)),通络组(30 mg·L~(-1))和补肾通络组(210 mg·L~(-1))。经Rankl诱导细胞破骨分化及药物干预4 d后,采用FITC标记鬼笔环肽染色检测肌动蛋白环表达,Real-time PCR检测RAW264.7细胞TRAP,CTSK和自噬相关基因5(ATG5),自噬相关基因7(ATG7),泛素结合蛋白62(p62)mRNA表达。结果:在体内研究中,与空白组比较,Pred组斑马鱼椎骨面积及ALP,BMP-2b,Runx2表达显著下降(P0.01),CTSK,TRAP,NFATC-1表达显著升高(P0.01)。与Pred组比较,通络组椎骨面积明显增加(P0.05),而补肾通络组椎骨面积显著增加(P0.01),补肾组,通络组及补肾通络组ALP,BMP-2b,Runx2表达均显著升高(P0.01),补肾通络组CTSK,TRAP,NFATC-1表达明显降低(P0.05,P0.01)。体外研究显示,与空白组比较,Rankl诱导组肌动蛋白环数目显著增多(P0.01),CTSK,TRAP和ATG5表达显著升高(P0.01),ATG7,p62表达明显升高(P0.05)。与Rankl诱导组比较,补肾组、通络组及补肾通络组均明显减少了肌动蛋白环数目及CTSK,TRAP表达(P0.05,P0.01),而补肾通络组同时降低了ATG5,ATG7,p62表达(P0.05,P0.01)。结论:补肾通络方能够显著改善泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松症,并通过降低自噬相关基因表达抑制破骨细胞分化。     

基于数据挖掘中药熏洗治疗跟痛症的用药规律研究

目的：探究中药熏洗治疗跟痛症的用药特点和组方规律。方法：通过中国学术期刊全文数据库、万方数据库、维普中文期刊数据库、中国生物医学文献服务系统,收集自建库以来至2022年3月治疗跟痛症的中药熏洗处方。采用Apriori、AGNES算法对中药使用频次、关联规则、聚类分析等进行挖掘分析。结果：共筛选出中药处方526个,用药236味,累计用药频次为5 706次。其中,用药频次居前3位的依次为透骨草、威灵仙、牛膝;按照功效分类,用药以祛风湿药和活血化瘀药为主;药性偏温,药味偏辛、苦,主要归肝经。分析药物之间的关联规则,挖掘出45个核心组合,多为祛风湿药和活血化瘀药配伍;依据聚类分析结果,筛选出一组核心药物组方、一组常用药物组方。结论：中药熏洗治疗跟痛症用药以祛风湿药和活血化瘀药为主,以“伸筋草、透骨草、红花、牛膝、威灵仙”为核心药物组合。此研究结果对临床熏洗中药规范化治疗跟痛症具有一定的参考意义。