抗脂多糖单克隆抗体的制备及功能研究

摘 要 目的：制备广谱结合活性抗脂多糖单克隆抗体,并探讨其保护活性。 方法：用噬菌体展示技术筛选出模拟脂多糖保守结构的多肽;将模拟肽与蓝载体交联后免疫BALB/c小鼠并制备单克隆抗体;间接ELISA与免疫荧光检测其结合活性;小鼠体内、外实验检测其保护活性。结果：经过三次融合,筛选到一株具广谱结合活性的抗脂多糖单克隆抗体SMU-3A8;间接ELISA与免疫荧光检测显示其可以和4种商品化脂多糖及6种G-菌发生交叉反应;体外实验显示SMU-3A8可以部分抑制脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7产生NO;体内实验表明其可以延长致死量鼠伤寒杆菌感染BALB/c小鼠的生存时间、提高生存率。结论：在本实验中,我们成功制备了一株具广谱结合活性,对鼠伤寒菌感染小鼠模型有保护作用的抗脂多糖单克隆抗体;为脂多糖相关研究提供了一个有力工具。 关键词 脂多糖 单克隆抗体 噬菌体展示 模拟肽     

LPS表位模拟肽诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 鉴定三种LPS模拟位合成肽的抗原性、诱导抗LPS抗体的产生及对细菌攻击的保护性.方法 三种LPS模拟位合成肽与载体BSA交联后,ELISA测定其与多种抗LPS单、多克隆抗体的结合活性;合成肽与蓝载体交联物免疫Balb/c小鼠,观察其诱发小鼠体内抗LPS抗体产生的规律及血清抗LPS抗体效价;鉴定针对细菌感染的保护性效应. 结果 三种合成肽均能与抗鼠伤寒和大肠杆菌LPS抗体结合;用合成肽-蓝载体交联物免疫动物可诱发小鼠体内针对两种LPS的抗体反应,并对细菌攻击的免疫动物具不同程度的保护性作用,以合成肽13a,13b及12W与蓝载体交联物免疫的小鼠在鼠伤寒沙门氏菌攻击后存活时间分别为(6.5±0.77),(9.5±1.38)及(9.3±0.75) d,而PBS/蓝载体对照组存活时间为5 d.结论 本研究所采用的3种LPS表位模拟肽作为疫苗免疫小鼠能够产生针对细菌攻击的保护性效应,提示此3种表位模拟肽作为LPS交叉保护性疫苗候选的可行性与可靠性.     

逆向案例教学法应用于临床免疫学继续教育的探讨

针对成人继续教育规律与临床免疫学教学特点,结合国内外教学经验,探讨以案例为先导的逆向案例教学法在临床免疫学教学中应用的可行性,为应用逆向案例教学法提高教学水平提供依据。     

重组人血红蛋白δ链的制备与鉴定

目的克隆人血红蛋白δ（delta）链蛋白基因，并在大肠杆菌中进行表达，经纯化与鉴定，获得δ链蛋白，为建立β-地中海贫血的免疫学筛查方法提供特异性抗原。方法从K562细胞中提取总RNA，采用RT-PCR技术获得目的片段并将其克隆到pET-32a及pET43．1a载体中，经PCR、酶切及测序验证，以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达。包涵体经变性、复性后以Ni^2＋亲和层析柱纯化，可溶性蛋白直接以Ni^2＋亲和层析柱纯化。采用Western Blot和ELISA分析鉴定表达产物。结果成功构建两种融合表达载体pET32-Hbδ及pET43．1-Hbδ，分别为包涵体表达和可溶性表达，纯化产物经Western blotting和ELISA鉴定均为δ链蛋白。结论克隆表达并获得了纯化的人血红蛋白δ链，为后续的抗体制备及地中海贫血的免疫筛选方法的建立提供了抗原。     

八年制医学生自身因素影响PBL教学评价的研究

目的 PBL教学作为以"学生为中心"的教学方式,学生取代了教师为主的关键地位,然而学生自身因素成为PBL教学过程中的重要因素,文章分析医学八年制学生自身内在因素对PBL教学效果的影响。方法采取多中心调查方式,选取全国多所高校采取PBL教学方式的八年制医学生,通过网络问卷调查形式采集数据,并对其进行统计分析,确定影响教学效果最明显的因子。结果在各种学生自身内在因素中,自学能力、合作精神、PBL教学经验对PBL教学效果有显著影响,而性别,学生绩点并不影响PBL教学效果。结论通过本研究,发现多个影响教学效果的学生自身因素,导师可通过增强学生的自学能力,加强小组合作精神,提高学生团队协作能力,从而发挥PBL最大的教学优势。     

广谱抗革兰氏阴性菌单克隆抗体3A8识别表位的初步研究

目的:利用噬菌体肽库技术筛选抗广谱革兰氏阴性菌与LPS单克隆抗体3A8的识别表位,以获得来源于不同LPS的保守表位.方法:用广谱抗G-菌、LPS的单克隆抗体3A8为靶,筛选噬菌体环七肽库,蚴鉴定阳性噬菌体克隆并测序.根据阳性保守序列合成短肽A2及A5,并与KLH载体交联,ELISA鉴定A2-KLH、A5-KLH与3A8单抗的结合.结果:随机挑选的33个噬菌体克隆中有15个可特异性与3A8结合,该结合可被LPS2630所抑制.根据阳性克隆DNA序列推导氨基酸序列,共有7种序列,均以疏水氨基酸为主,且包含保守序列Ser Pro Pro/Pro X Pro;选择所获阳性序列经设计与改造合成延长的两个环肽;经ELISA鉴定表明这些环肽可特异地与3A8结合.结论:得到可被3A8单抗特异性识别并含保守残基Ser Pro Pro/ProX Pro的阳性序列,据此合成的短肽可特异性结合3A8,提示该短肽可能模拟LPs共同表位的抗原性,有望成为疫苗候选表位.     

重组人血红蛋白δ链的制备与鉴定

目的克隆人血红蛋白δ(delta)链蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达,经纯化与鉴定,获得δ链蛋白,为建立β-地中海贫血的免疫学筛查方法提供特异性抗原。方法从K562细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得目的片段并将其克隆到pET-32a及pET43.1a载体中,经PCR、酶切及测序验证,以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达。包涵体经变性、复性后以Ni2+亲和层析柱纯化,可溶性蛋白直接以Ni2+亲和层析柱纯化。采用Western Blot和ELISA分析鉴定表达产物。结果成功构建两种融合表达载体pET32-Hbδ及pET43.1-Hbδ,分别为包涵体表达和可溶性表达,纯化产物经Western blotting和ELISA鉴定均为δ链蛋白。结论克隆表达并获得了纯化的人血红蛋白δ链,为后续的抗体制备及地中海贫血的免疫筛选方法的建立提供了抗原。     

护理专业继续医学教育免疫学教学探讨

面对我校继续教育学院逐年扩大的招生规模,新设专业越来越多,我们针对护理专业的特点,通过优化医学免疫学的教学内容和课程体系,培养学生的学习兴趣,充分发挥学生的主观能动性,提高继续教育免疫学教学中"教"与"学"的质量。     

新型双组分3,3'''',5,5''''-四甲基联苯胺显色剂的配制

目的制备高敏感性、低成本的双组分3,3’,5,5’—四甲基联苯胺(TMB)显色剂。方法以TMB粉剂为原材料,通过对显色剂溶液各成分进行优化及加入稳定剂,用不同的ELISA法对其检测的敏感性进行鉴定;在保存的不同时间点,以紫外分光测其自发显色并加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗直接显色来检测其在保存过程中的稳定性。结果成功制得了敏感、稳定且成本低廉的双组分TMB显色剂。ELISA结果显示,本显色剂敏感性与进口商品化产品无明显差异,而在本底的控制上,我们的显色剂则要优于进口产品;稳定性实验显示本显色剂可在4℃稳定保存1年以上。结论本显色剂稳定、敏感,为HRP的检测提供了一种经济、有效的选择。