矽肺大鼠肺组织let-7d-3p和miRNA-21-5P差异表达及其初步分析

目的探索let-7d-3p和miRNA-21-5p在二氧化硅(SiO_2)诱导的大鼠纤维化肺组织中的差异表达及其意义。方法 SPF级Wistar雄性大鼠随机分为对照组和模型组,每组30只,采用一次性气管内灌注1 ml SiO_2悬浊液建立大鼠矽肺模型,对照组大鼠相同方法灌注1ml灭菌生理盐水。分别于染尘后1、7、14、21、28 d采集各组大鼠肺组织,每组取6只,对3只大鼠肺组织进行病理学观察,另外3只采用miRNA微阵列芯片技术筛选肺组织中差异表达的miRNA,通过miRNA芯片筛选结合反转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证let-7d-3p和miRNA-21-5p在两组间的表达水平,对let-7d-3p和miRNA-21-5p进行靶基因预测并进行GO(gene ontology)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路分析。结果对照组大鼠1、7、14和21 d Masson染色均可见正常肺组织,未发现胶原纤维,28 d大鼠肺间质和支气管周围仅有少量纤细的胶原分布;模型组大鼠1 d和7 d未发现胶原纤维,14 d染色可见较多以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,未见明显纤维组织,21 d和28 d模型组大鼠肺间质内可见大片状密集的胶原纤维沉积,在肉芽组织、支气管及血管壁周围胶原蛋白增生明显。模型组中let-7d-3p的表达水平均显著下调,miRNA-21-5p表达水平均显著上调,与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论模型组中let-7d-3p和miRNA-21-5p表达变化明显,可能与早期矽肺的发生发展有关。     

腺相关病毒分别介导转化生长因子β1和血管内皮生长因子联合转染促进糖尿病皮肤溃疡愈合的生物学效应

目的 探讨腺相关病毒(AAV)介导转化生长因子β1(TGFβ1)和血管内皮生长因子(VEGF)联合转基因治疗促进糖尿病皮肤溃疡愈合的生物学效应.方法 采用四氧嘧啶建立兔糖尿病动物模型,并通过手术方法建立皮肤溃疡创面.将AAV-TGFβ1和AAV-VEGF联合转染糖尿病兔耳皮肤溃疡创面处.通过皮肤溃疡创面愈合大体形态学观测、TGFβ1和VEGF双重免疫组化染色、微循环血管密度显微镜观察计数、主胶原(Ⅰ、Ⅲ型胶原)提取及免疫印迹检测、胶原微量定量检测等方法,研究AAV-TGFβ1和AAV-VEGF联合转基因治疗在促进糖尿病兔耳皮肤溃疡愈合中的生物学效应.结果 AAV-TGFβ1和 AAV-VEGF联合转基因治疗组与对照组皮肤溃疡创面愈合的检测比较发现: (1) 联合转基因治疗组TGFβ1和VEGF基因转录表达增多;(2) 联合转基因治疗组创缘毛细血管叉密度(19.18±3.56)个/mm2高于对照组(6.43±1.52)个/mm2,差别有统计学显著性意义(P＜0.05);(3) 联合转基因治疗组愈合组织中胶原含量均增多(P＜0.05),而且Ⅰ型和Ⅲ型胶原构成比中I型胶原的比例增加.结论 AAV-TGFβ1和 AAV-VEGF可联合高效转染糖尿病兔耳皮肤溃疡创面并有效地促进溃疡愈合.     

部队救援人员认知情绪调节与抑郁的早期筛查模型

目的调查某部1324名救援人员认知情绪调节策略及抑郁自评结果,探索认知情绪调节策略与抑郁的预测模型。方法采取整群抽样方式,现场调查某部救援人员共1324名,采用患者健康问卷抑郁量表(PHQ-9)、认知情绪调节量表(CERQ)进行调查。运用二元logistic回归分析建立抑郁筛查预测模型。结果某部救援人员抑郁筛查阳性率为11.3%,筛出抑郁状态150名。Logistic回归分析结果显示,灾难化(P=0.000)、积极重新评价(P=0.001)、接受(P=0.000)三种认知情绪调节策略可显著预测抑郁筛查阳性,OR及95%CI分别为:1.509(1.348~1.689)、1.197(1.079~1.329)及0.817(0.739~0.903)。灾难化、接受与抑郁情绪呈正相关。结论灾难化、接受积极重新评价这三种认知情绪调节策略对该部救援人员抑郁自评结果有预测作用。     

核因子-κB基因过度表达与肝细胞恶性转化的关系

目的 探讨核因子-κB（NF-κB） mRNA在肝癌（HCC）形成过程中的表达与动态改变。方法 以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠诱发肝细胞癌变,以病理组织学（HE染色）观察肝细胞形态学的变化,以巢式逆转录聚合酶链反应（Nested-RT-PCR）扩增分析NF-κB mRNA表达,并定量分析肝细胞癌变过程肝组织中NF-κB的动态表达。结果 SD大鼠在喂饲2-FAA后,肝细胞在形态学上出现颗粒样变性、癌前病变到HCC形成多个发展阶段。在HCC形成过程中,肝组织总RNA水平呈动态梯度增加,表现为癌变组〉癌前组〉变性组〉对照组（P〈0.01）;肝组织NF-κB mRNA扩增的阳性率在变性组、癌前组和癌变组均为100%,明显高于正常对照组（P〈0.01）;肝组织中NF-κB呈明显的梯度增加,且与肝细胞的恶性转变呈正相关关系。结论 肝癌形成过程中NF-κB mRNA过度表达,与肝癌发生、发展密切相关。     

硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞DNA的损伤及还原型谷胱甘肽的保护作用

目的 研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞（Chinese hamster fibroblast cell line,CHL）DNA的损伤作用及还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）的保护作用。方法 将CHL分为2组,均以10、100、1000μmol／L硫芥染毒,其中1组以10mmol/L的GSH加以保护,分别在不同时间点（即刻,6、24、48、72 h）收集细胞进行单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis assay,SCG）检测。结果 硫芥染毒组CHL的DNA迁移率和迁移度在染毒后6、24、48、72h均显著高于相应时刻的生理盐水组和溶剂对照组（P〈0．01）。GSH保护组DNA迁移率和迁移度亦显著增高（P〈0．01）,但较之单纯硫芥染毒组DNA迁移率下降了13．0％-52．5％,迁移度亦显著下降。结论 硫芥对CHL的DNA有损伤作用,呈时间、剂量关系。GSH对DNA的损伤有一定保护作用。     

氧化应激对鱼藤酮PC12细胞中的毒性作用

目的探讨氧化应激在鱼藤酮多巴胺能神经元PC12细胞中的毒性作用。方法用高分化的PC12细胞作为多巴胺能神经元的细胞模型,经不同浓度的鱼藤酮处理,观察细胞形态及其超微结构,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性和增殖抑制及细胞代谢状态,生化分析法检测SOD活力、MDA含量,特异性DCF-DA荧光探针检测细胞内ROS水平。结果经鱼藤酮处理24 h后PC12细胞突起样结构消失,细胞体积变小、形态变圆,部分细胞呈悬浮状态;细胞线粒体代谢和超微结构发生改变;PC12细胞增殖抑制,细胞活性降低;细胞内的SOD活力下降,MDA含量增高;荧光探针标记显示PC12细胞荧光强度增加,细胞内ROS含量增加。结论鱼藤酮在体外对多巴胺能神经元有毒性作用,可抑制细胞增殖,影响线粒体代谢,氧化应激可能在鱼藤酮的多巴胺神经元毒性机制中起作用。     

前颅底肿瘤的手术治疗-85例回顾性分析

目的 探讨在对前颅底肿瘤实施显微手术时,手术入路的选择和颅底重建的原则.方法 回顾性总结前颅底肿瘤患者85例的临床资料.借助术前影像学(CT和MR)资料,准确评估肿瘤的部位、大小、性质和周边组织受累情况等,从而选择合理且熟悉的手术入路.术中尽可能在显微镜辅助下对肿瘤进行微创切除,降低术后致残率和病死率.并根据肿瘤切除后颅底结构的缺损程度决定相关的修复方案.结果 85例患者中经冠状开颅(包括半冠)入路的26例.经改良翼点入路的38例,经额眶入路的13例,经额、鼻窦联合入路的9例.肿瘤镜下全切除的79例,次全切除4例,部分切除2例.术后有83例患者的临床症状获得不同程度的缓解,无手术死亡病例.13例患者的肿瘤发生远期复发,其病理性质以恶性为主.所有颅底脑膜缺损的患者匀在一期重建,采用自体肌腱膜或人工脑膜加生物胶进行严密修复.对小于3 cm的颅底骨质缺损一般不实施重建,有5例患者的骨性缺损大于3 cm,采用了人工材料(硅橡胶为主)进行重建.全部患者中有4例在术后发生短暂的脑脊液漏,均通过保守治疗而愈合.结论根据肿瘤的大小、部位和周边组织的受累情况选择适当的入路,对肿瘤患者实施微创切除并在一期进行必要的颅底修复是治疗前颅底肿瘤的有效方法 .手术入路应尽量有利于病灶切除,并降低术后致残率和病死率,颅底重建时必须恢复硬脑膜的严密性,维持颅底组织的良好支撑,同时不干扰对肿瘤的术后复查和辅助治疗.     

医院合同护士压力源及其影响因素的调查与分析

目的 探讨合同护士主要压力源及其影响因素.方法 采用护士工作压力源量表对北京市某医院109名合同护上进行调查.结果 合同护士总工作压力水平为(2.76±0.52)分.排在前3位的压力源依次是护理々业及工作方面、工作量及时间分配方面和病人护理方面.,职称、科窜对合同护士工作压力的影响均有统计学意义(P<0.05).结论 合同护上压力程度高,其中经常倒班、工资及其他待遇低、晋升和继续深造的机会太少、担心上作中出现差错事故等是合同护士主要的压力源.合同护士压力程度受不同科室及职称的影响.建议从医院管理者和合同护士自身方面共同努力,减轻上作压力.     

选择性血管结扎法建立大鼠脑动脉瘤模型

目的 探讨选择性血管结扎法对大鼠脑动脉瘤形成的影响.方法 SD大鼠50只,随机分为3组:(1)A组20只:结扎左侧颈总动脉+两侧肾动脉后支(各侧1支);(2)B组20只:"8"字形结扎左侧颈内、外动脉+电凝并切断两侧肾动脉(各侧只留1个分支);(3)C组为假手术组10只.术后喂养含0.9%的盐及0.12%β-氨基丙腈的饲料.4周后处死,取大鼠脑动脉Willis环,在光镜下观察其病理的变化.结果 A组大鼠ACA/OA分叉处均未见有进展期动脉瘤,仅3个早期动脉瘤样改变.B组大鼠中发现12个进展期动脉瘤和2个早期动脉瘤样改变.C组中未见动脉瘤形成.结论 血管壁结构的破坏或变弱和高血液动力学压力是动脉瘤形成的主要因素.     

小干扰RNA抑制核因子-κB活化对HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA(SiRNA)抑制核转录因子(NF)-κB活化对肝癌细胞凋亡的影响.方法 化学合成NF-κB siRNA和阴性对照siRNA,脂质体法转染HepG2细胞,用巢式RT-PCR和荧光定量PCR检测NF-κB mRNA表达情况;免疫组织化学法、酶联免疫吸附法、Western b10t检测NF-κB蛋白表达情况;用磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素法检测细胞凋亡,分析NF-κB表达抑制和细胞凋亡间关系.多个样本均数间的比较先行方差齐性检验,方差齐时行单因素方差分析;计数资料比较采用确切概率法分析.结果 NF-κBp65 mRNA在HepG2细胞相对表达量为1.13±0.03,在正常肝细胞L02为0.29±0.07,两者比较,t=27.02,P<0.05,差异有统计学意义.利用NF-κB siRNA干扰可下调NF-κB表达,且呈剂量、时间依赖;NF-κB siRNA转染HepG2细胞72h后,NF-κBmRNA和蛋白表达分别下降了93%和62%,抑制NF-κB表达使HepG2细胞凋亡增加85%. 结论 NF-κB在肝癌细胞中高表达,NF-κB SiRNA能特异性抑制其在肝癌细胞中活化并促进癌细胞凋亡发生.